对审查意见（ⅰ）的回复

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1、对审查意见（Ⅰ）的回复[1]文字不够精练和流畅。【回复】语言已经进一步精练，体例和格式已按修改意见并参考2004年2月的《化工学报》修改。具体记录见后。[2]因为该文中并没有将CAT真正地提取出来。而是将其定位在线粒体和过氧化物酶体地沉淀组分中，所以“快速提取”地提法并不确切。【回复】接受审查意见。本文建立的CAT部分提纯方法是为了酶活的测定。重点在于能够表征热带假丝酵母菌CAT酶活的真实情况，并保证方法的可靠性。相对于酶（蛋白质）纯化工作的耗时，本方法是快速的。根据审查意见及考虑严谨性，将“快速提取”改为“快速部分提纯”。分别在文中下列地方作了相应修改：P

2、1.中文摘要第1行：“快速提取”改为“快速部分提纯”P3.末段第3行：“提取”改为“部分提纯”P7.第1行，“提取”改为“部分提纯”P13结论第1行，“提取”改为“部分提纯”[3]关于描述重组菌产酸和烷烃转化率的段落。因为发酵过程中影响因素很复杂，产物产量的变化也很大。摇瓶培养中产物10％左右的变化并不算大。关键看重复性是否好。所以，是否能列表说明做了几次重复实验，每次实验结果间的误差。以说明这种变化是稳定的和显著的。【回复】接受审查意见。发酵过程中影响因素众多，因此本文在研究过程中也非常重视重复性，在P10末段中有论述（“多次考察了……”）。从严谨性考虑，

3、已经增加重复实验的数据。见P11页的Table1.Comparisonoftherecombinantandwildtypeondicarboxylicacidproductivityandconversionrateofalkane.[4]建议增加构建CAT缺失重组菌株以及PCR等方法证明过程的内容。以增加其完整性。【回复】本文没有论述CAT缺失重组菌株构建和PCR验证过程，是出于以下两点考虑：第一，本文着重于CAT酶活测定方法的建立和重组菌产酸性能的研究，基因工程的内容与本文标题不太相符；第二，若增加此部分内容，则显得内容过多。但由于此部分工作是本文的基

4、础，文中对此会给出简明扼要的描述，并引用公开发表的文献说明。见文献9，已作详细说明。对审查意见（Ⅱ）的回复[1]能进一步把本文的工作和前期有关基因敲出部分的工作区别开来。本文显然不涉及基因方面的工作，文中有些地方论述过于模糊。另外，对于前期工作最好能引用已公开发表的文献。【回复】本文是建立在前期工作的基础上的，因此会简明扼要地提及前期工作的结果。对于文中论述模糊和用词不当的地方已做详细修改。引用的文献9是公开发表的国际会议论文。会议名称为：AsiaPacificBiochemicalEngineeringConference(APBioChEC03)Bris

5、bane,Australia.[2]第八页最后一段对前期有关CAT基因工作的描述易引起误解，让人以为只是获得了敲除CAT基因的热带假丝酵母的杂合子，而不是纯合子，即热带假丝酵母的一套染色体上缺失了CAT基因而在另一套染色体上CAT基因还存在。大家知道，这种杂合子是不稳定的，表型也很快会发生变化，对其性质进行研究也就没有多大意义了。因此请作者重新把前期有关基因部分的工作论述清楚。【回复】热带假丝酵母是二倍体（核内有两套染色体），每套染色体上有一个CAT基因的拷贝。在前期的工作中，通过同原重组的方法敲除了其中一套染色体上的CAT基因。而另一套染色体上仍然有CAT

6、基因。一般情况下，对于具有有性生殖阶段的微生物，这种杂合子的性状是不能稳定遗传的。但是热带假丝酵母的有性生殖阶段已经丧失，进行的是无性生殖。无性生殖的重要特征就是子代能够完全继承其亲代的遗传物质，其性状和亲代保持一致并能够稳定遗传。另一方面，本文的实验结果对此也是一个很好的证明。关于CAT基因全部敲除的重组菌构建工作正在进行，对其生长和产酸性能目前还不好预测。已在文中下列两处修改：P3.倒数第2段，增加对重组菌和杂合子的解释。P8.2.2.1节第1段，删除关于重组菌构建的描述。[3]其余小处修改见文稿。【回复】已经根据文中意见进行修改。详见下列修改记录。体例

7、格式改动记录P1.中文标题，标点符号，英文标题，作者格式，脚注内容，精简中文摘要【说明】脚注内容中的“973规划”英文翻译遵从编委的意见，改为“theStateKeyDevelopmentProgramforBasicResearchofChina”。另外笔者查得另一种译法：NationalKeyBasicResearchProgram（NKBRP）。（参见http://www.research.pku.edu.cn/kyxm/jjbz.htm），不知哪种更为准确。Keyfoundation指的是国家自然科学基金重点项目，现已准确表述。已补上中图分类号具体分

8、类921.7[发酵法制有机酸921.+7其它]P2.