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《产组织型纤溶酶原激活剂cho工程细胞无血清培基的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、产组织型纤溶酶原激活剂CHO工程细胞无血清培基的研究药物生物技术1999年第2期第6卷论文作者：陈昭烈 刘 红 吴本传 林福玉 李世崇 黄培堂单位：军事医学科学院生物工程研究所，北京100071关键词：细胞培养；CHO工程细胞；无血清培基；组织型纤溶酶原激活剂 摘 要 在对DMEM：F12(1∶1)进行优化的基础上，以细胞生长和组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)表达为评价指标，筛选无血清培基添加成分，建立了由优化DMEM：F12(1：1)、胰岛素、PluronicF-68、维生素C、乙醇胺和微量元素混合液组成的适
2、于产t-PACHO工程细胞4B3生长和t-PA表达效果均优于相同条件下用含血清培基培养的效果。StudyonSerum-FreeMediumforgenetically-engineered cHOCellsProducingTissueTypePlasminogenActivator chenZhaolie,LiuHong,WuBenchuan,LinFuyu,LiShichong,HuangPeitang(InstituteofBiotechnology,AcademyofMilitaryMedicalS
3、ciences,Beijing100071) Abstract BasedontheoptimizationofDMEM∶F12(1∶1),andtheselectionofsupplementsforserum-freemediumusingthecellgrowthandthet-PAexpressionastheevaluationindexes,aserum-freemedium,DF5S,whichconsistedofoptimizeddMEM∶F12(1∶1),insulin,pluronicF-
4、68,vitaminC,traceelementmixandethanolamine,forthegrowthofgenetically-engineeredCHOcellline4B3wasformulated.Immobilizedcultivationof4B3cellswithCytoporeinspinnerflasks,thegrowthandt-PAproductionof4B3inDF5Sweresuperiortothatobservedinserum-containingmedium. Ke
5、yWords Cellcultrue,Serum-freemedium,RecombinantCHOcell,t-PA 随着医药生物高技术的研究和应用的发展，动物细胞无血清培养技术已成为优质、高效、低成本地生产具有重要医用价值的动物细胞产品的重要技术［1］。动物细胞无血清培养的核心技术是与培养细胞相适应的无血清培基。由于无血清培基成分明确、质量一致、蛋白含量低，因而不仅有利于提高细胞产品生产的稳定性并使细胞产品易于纯化，同时也可使不同的细胞能各自在最有利其生长或最有利于表达目的产物的培养环境中生长［2］。随着越
6、来越多的编码具有重要医用价值的人体蛋白基因相继在CHO工程细胞中获得高效表达，要求有相应的无血清培基来满足重组蛋白大量生产的需要。商品化的CHO工程细胞无血清培基价格昂贵，不能实际用于CHO工程细胞的大规模培养。本文介绍一种适于产组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)CHO工程细胞生长和t-PA生产的价格低廉的无血清培基。 1 材 料 1.1 细胞 产t-PACHO工程细胞4B3是由含t-PA目的基因和dhfr标记基因的表达载体，用电击法转染CHO-dhfr细胞所建立的具有稳定表达t-PA表型的细胞株，t-PA的
7、表达水平为800～1000IU/106cells·d-1(由本所蛋白质工程研究室构建)［3］。 1.2 培基和培基添加成分 DMEM、F12、MEM、RPMI1640为GIBCO产品。胰岛素(I)、铁转运蛋白(T)、丝氨酸、脯氨酸、蛋白胨(P)、酵母提取物(Y)、PluronicF-68(F-68)、腐胺(PUT)、亚硒酸钠(SE)、乙醇胺(ETH)、维生素C(VITC)、柠檬酸铁、硫酸锌和硫酸铜购自Sigma公司；新生小牛血清(NBS)和牛血清白蛋白(BSA)为国产试剂。 1.3 细胞固定化培养载体 C
8、ytopore多孔微球为Pharmacia产品。 1.4 细胞计数和t-PA测定试剂 四甲基偶氮唑蓝(MTT)为Fluka产品：N.N-二甲基酰胺、TritonX-100、牛凝血酶和牛纤维蛋白原为国产试剂；t-PA标准品由英国国立生物标准和控制研究所(86/670,NIBSA)提供 2 方 法 2.1 基础培基的选择及优化 以4B3细胞的生长为指标，在方瓶中比较
