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1、·1810·中华医学杂志2004年11月2日第84卷第21期 NatlMedJChina,November2,2004,Vol84,No.21·临床论著·SARS冠状病毒单克隆抗体制备及在肺尸检标本染色中的应用许慧 倪安平 卢朝辉 陈杰 【摘要】 目的 制备抗SARS冠状病毒的单克隆抗体,用于SARS的实验室诊断。方法 灭活SARS冠状病毒(PUMC01)全病毒免疫BALB/C小鼠,取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞(NS21)融合,用酶联免疫吸附试验(ELISA)、间接免疫荧光法(IFA)及免疫印迹法对所获得的细胞克隆进行筛选和鉴定
2、,并用其中一株(M2)杂交瘤诱生的腹水单克隆抗体对SARS患者尸检肺组织切片进行免疫组织化学染色。结果 共筛选出6株杂交瘤细胞,ELISA及IFA法证实其分泌的单克隆抗体与SARS冠状病毒有特异性反应,与其他常见呼吸道病原体均无交叉反应。免疫双扩散方法鉴定1株杂交瘤细胞(M2)为免疫球蛋白IgG3型,其余5株均为IgG1型。免疫印迹试验显示1株杂交瘤细胞(M2)分泌的抗体与相对分子质量68000的蛋白有特异性反应;4株杂交瘤细胞分泌的抗体与相对分子质量27000的蛋白有特异性反应,1株在免疫印迹上未见到结果。SARS患者尸检肺
3、组织病理切片免疫组织化学染色阳性,在肺泡上皮细胞、支气管上皮细胞及巨噬细胞的胞浆均可见阳性颗粒。结论 我们制备的6株单克隆抗体是抗SARS冠状病毒的特异性单克隆抗体,用于SARS尸检肺组织免疫组化染色,结果阳性。【关键词】 抗体,单克隆; 核壳蛋白质类; 冠状病毒科PreparationofmonoclonalantibodiesagainstSARScoronavirusandstainingusageinlungautopsyspecimensXUHui,NIAn2ping,LUZhao2hui,CHENJie.Depar
4、tmentofClinicalLaboratory,PUMCHospital,CAMSandPUMC,Beijing100730,China【Abstract】ObjectiveTopreparemonoclonalantibodiesagainstSARScoronavirus(SARS2CoV)onthepurposetoexplorethediagnosismethodsofSARS.MethodsFemaleBALB/CmicewereimmunizedwithdisinfectedSARS2CoV(PUMC01)an
5、dthespleencellswerefusedwithmyelomaNS21cells.Thehybridomacellstrainswerescreenedbyenzyme2linkedimmunosorbentassay(ELISA)、indirectfluorescent2antibodyassay(IFA)andWesternblotting.AutopsylungtissuesectionsfromSARSpatientswerestainedwithascitesofmonoclonalantibody(M2st
6、rain)byimmunohistochemicaltechnique.ResultsSixstrainsofhybridomasthatproducedthemonoclonalantibodiesagainstSARS2CoVwereobtained.ThehybridomasweretestedtohavespecificreactionswithSARS2CoVandnocross2reactivateswithothercommonrespiratorydiseasecausingpathogens.Ofthe6st
7、rains,1wasidentifiedastheimmunoglobulinG3(IgG3)isotype,5wereIgG1.Westernblottingshowedthatonestrain(M2)reactedwith680002Dalton(68KD)proteinandfourstrainswith270002dalton(27KD)protein.BandofM4stainwasnotgotbywesternblotting.Brownparticleswereseeninmacrophagesandpneum
8、ocytesinautopsylungtissuesfromSARSpatients.ConclusionMonoclonalantibodieswemadewerespecifictotheSARS2CoV,andtheyhadbeenusedtodetectSARS2Co
