邻苯二甲酸二论文

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1、邻苯二甲酸二论文宋晓峰，魏光辉，邓永继，张德迎，陈旋，刘星【关键词】二甲酸二【Abstract】AIM:ToexplorethemRNAexpressionofINSL3geneinLeydigcellsoffetalandneonatalmiceexposedtodi(2ethylhexyl)phthalate(DEHP)invivoandinvitro.METHODS：TheLeydigcellsfetalmousetestisandediumandidentifiedby3betahydro

2、xysteroiddehydrogenase(3βHSD).Reversetranscriptasepolymerasechainreaction(RTPCR)andinsituhybridizationinetheexpressionlevelsofINSL3mRNAinprimarilyculturedLeydigcellsincubatedg/L,respectively).Pregnantmiceg/kgbodygestationday(GD)12topostnatalday（PND）3.

3、TheexpressionofINSL3geneinneonatalmousetestisarilyculturedLeydigcellsandneonatalmousetestisexposedtoDEHPRNAinDEHPtreatedgroupsincludingtheprimarilyculturedLeydigcellsandmalemouseoffspringstestisRNAinLeydigcellsinvitroandinvivo.Itmaybeapossiblemechanis

4、mthatDEHPinterferesdevelopmentandcausescryptorchidism.【KeyRNA表达的影响.方法：DEHP50，100，200mg/L分别作用于原代培养的小鼠胚胎Leydig细胞，应用RTPCR和原位分子杂交技术检测DEHP对Leydig细胞INSL3mRNA表达的影响；DEHP分别以低、中、高三组剂量（100，200和500mg/kgd）灌胃作用于GD（Gestationday）12～PND（Postnatalday）3孕鼠，RTPCR检测新生小鼠睾丸I

5、NSL3mRNA表达的相对强度.结果：DEHP改变原代培养的小鼠胚胎Leydig细胞和新生小鼠睾丸的形态结构；各实验组包括原代Leydig细胞及不同时间点的新生鼠睾丸INSL3mRNA表达水平、表达相对强度均明显低于对照组(P0.05,或P0.01).结论：DEHP下调小鼠睾丸Leydig细胞INSL3mRNA的表达,可能是影响引带发育导致隐睾的机制之一.【关键词】2乙基己基,邻苯二甲酸；胚胎；Leydig细胞；原位分子杂交；逆转录聚合酶链反应0引言邻苯二甲酸二（2乙基）己酯（DEHP），是塑料工

6、业中广泛使用的增塑剂，是邻苯二甲酸酯类化合物（PAE）中的一种，也是公认的环境内分泌干扰物，可影响机体内分泌的活性.研究发现邻苯二甲酸酯类化合物与先天性疾病如隐睾、尿道下裂等的发病具有明显的相关性［1-3］.我们拟通过体内体外实验研究DEHP对胚胎及新生小鼠睾丸Leydig细胞胰岛素样因子3(INSL3)mRNA表达的影响，探讨其与隐睾发病的相关分子机制.1材料和方法1.1材料昆明小鼠由重庆医科大学动物中心提供,合格证号为SYXK（渝）20040001.孕期计算以成年雌雄小鼠合笼后，雌鼠见阴栓为受

7、孕0d.DMEM/F12(Hyclone公司),胎牛血清（天津TBD公司），DEHP（上海化学试剂有限公司），玉米油（美国Sigma公司），Trizol（Gibco公司），TaqDNA聚合酶、MMLV逆转录酶、dNTP(Promega公司)，原位杂交试剂盒（博士德公司），引物：INSL3，βactin引物序列应用软件Primer自行设计，由上海生工生物公司合成.1.2方法1.2.1睾丸Leydig细胞的分离、培养、鉴定取孕16d母鼠子宫内雄性仔鼠睾丸Leydig细胞培养、纯化、鉴定，方法见文献［4

8、］.1.2.2原位分子杂交检测分离的胎鼠Leydig细胞接种入放有爬片的培养板内，密度1×108个/L，培养72h后，换液，培养板孔内加入等量的不同浓度的DEHP血清溶液（培养液内药物终浓度分别为50，100和200mg/L），空白对照组不加药，溶剂对照组加入等量的血清.每个药物浓度为1组，每组作8个平行孔，培养12h，取出Leydig细胞爬片，每组3张爬片苏木素－伊红染色(HE)，观察细胞形态变化，余下5张采用原位分子杂交技术检测睾丸Leydig细胞INSL3mRNA的表达.探针