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1、血竭提取物对人成纤维细胞增殖的影响论文李丹，郭树忠，王胜春，张琳西，胡永武【关键词】血竭；成纤维细胞；细胞增殖；伤口愈合EffectofDragonsbloodextractsonproliferationofhumanfibroblastcells【Abstract】AIM:ToinvestigatetheeffectofDragonsbloodontheproliferationoffibroblastcellsinvitroandtoexplorethemechanismbyotesanfibroblastcellsediacontaininggradientconcentrati
2、onsof3kindsofDragonsbloodextracts(extractedbychloroform,acetidinandalcohol,respectively),inationassessedeintervals.Thegroostsuitableconcentrationetry(FCM)inethechangesofcellcycleatthisconcentration.RESULTS:The0.5-2.0g/LdilutionofDragonsbloodextractbyacetidinenhancedtheproliferationoffibroblastina
3、dosedependentmanner.The2.0g/LalconcentrationofDragonsbloodextract,anditcouldincreasethecellratioinSphaseofcellcycleby18.3%ofthatincontrolgroup(P0.01).CONCLUSION:Dragonsbloodextractbyacetidincouldpromotetheproliferationofculturedhumanfibroblastcellsinvitro,anditmightbebeneficialtogranulationtissue
4、formationduringa，美国）；MTT(Amresco，美国)；96孔板（COSTAR，美国）；CO2孵箱(Heraeus，上海)；倒置显微镜(Olympas)；酶联免疫检测仪(Labsystems，芬兰)；血竭（皇冠牌，印度尼西亚）；流式细胞仪(ELITEEspCoulter).1.2方法1.2.1成纤维细胞分离培养实验所用正常皮肤成纤维细胞来源于健康人体皮肤，采用组织贴块法进行原代培养，实验用5～10代细胞.1.2.2血竭提取物制备将血竭生药分别经氯仿、乙酸乙酯、950mL/L乙醇依次回流提取，得到3种提取液分别为氯仿提取物（A），乙酸乙酯提取物（B）、乙醇提取物(C)，经
5、水浴挥干溶剂，再分别以二甲基亚砜（DMSO）助溶得到浓度为200g/L的溶液，流通蒸汽灭菌30min，常温保存待用.使用时将A,B,C3种提取液分别溶解于DMEM培养液，配制成浓度为0.125,0.25,0.5,1.0,2.0,.freelL/LCO2培养箱中孵育24~48h，待细胞完全贴壁后，吸弃培养液，A,B,C组分别加入不同浓度（0.125,0.25,0.5,1.0,2.0,4.0,8.0g/L）血竭提取物条件培养液（150μL/孔），D组加入含10g/LDMSO的DMEM（150μL/孔），E组加入DMEM培养液（150μL/孔），每组均设6个平行孔及1个空白对照孔（用于检测时调
6、零）.于37℃,50mL/LCO2培养箱中培养24h后，每孔加5g/LMTT试剂10μL，孵箱中培养4h，吸弃培养液，加入DMSO（150μL/孔），震荡10min.酶联免疫检测仪在450nm波长下读取光吸收值A.1.2.4细胞生长曲线测定应用MTT比色分析法（方法同上），取0,12,24,36,48,60,72h,7个检测点，分为实验组（血竭提取物最适浓度）和对照组（DMEM），每组设6个附孔，用光吸收值A反映细胞数量，计算平均值并绘制生长曲线.1.2.5细胞周期测定采用流式细胞仪，具体如下:取8瓶对数生长期的成纤维细胞，每瓶计数约2.5×105.弃去培养液，随机选取4瓶加入最适培养浓
7、度血竭提取液各5mL，另外4瓶作为对照组各加入5mLDMEM培养液，在37℃,50mL/LCO2培养箱内孵育24h，弃去药液及DMEM培养液，加入胰酶消化5min，用含100mL/L胎牛血清DMEM终止消化，收集细胞，1000r/min离心5min，加入PBS洗涤2次，离心(800~1000r/min,5min)，弃上清，加入1mLPBS将细胞团块吹散，再加入冰乙醇2mL固定，碘化丙啶(PI)避光染色15min，流式细胞仪检测细胞周
