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《舟山眼镜蛇毒蕈碱样多肽的分离及其对m胆碱受体的激动效应论文》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、舟山眼镜蛇毒蕈碱样多肽的分离及其对M胆碱受体的激动效应论文.freelol/L),其相对分子质量约14kD。该多肽可引起离体豚鼠回肠纵行肌收缩,此效应可被阿托品阻断。结论舟山眼镜蛇蛇毒中获得与M胆碱受体具有高亲和力的多肽,该多肽对M胆碱受体具有激动效应。关键词:眼镜蛇毒液类;受体,.freeluscarinicpeptide(MP)fromNajaatravenomandtostudytheeffectofMPinmuscariniccholinergicreceptor(mChR).MethodsMPhadbeenisolatedandpurifiedfromNajaa
2、travenombygelfiltrationonSephadexG50andSephadexG100,chromatographyonionexchangerCMSepharoseFF.HomogenicityandmolecularinedonSDSPAGE.IsolatedileallongitudinalmusclesoftheguineapigsChR.TheaffinityofMPtoratbrainsynaptosomalmembraneNajaatravenomcoulddisplace3HQNBfromratbrain.Itsmolecular,MPpr
3、oducedapotentcontractionuscarinicpeptidefromNajaatravenomuscarinicagonist.KEY胆碱受体有亲和力的毒蕈碱样毒素(muscarinictoxins,MT)――MT1和MT22,此后,陆续发现其他的MT。迄今为止,从曼巴蛇毒中至少分离得到12种类似的神经毒素25,研究发现MT对M胆碱受体亚型选择性较高,在药理和生理研究中是一种很好的工具药。我国蛇种舟山眼镜蛇与曼巴蛇同属眼镜蛇科,笔者拟从舟山眼镜蛇蛇毒中分离毒蕈碱样多肽,并观察其与M胆碱受体的关系。1材料与方法1.1材料1.1.1蛇毒舟山眼镜蛇蛇毒,广州
4、新源蛇毒生产基地提供。1.1.2试剂与仪器SephadexG50、SephadexG100和CMSepharoseFF(美国Amersham公司);3HQNB,48Ci/mmol,1.0mCi/mL(美国Amersham公司);其他试剂均为国产分析纯;GF/C玻璃纤维滤膜(英国D公司)。1.1.3动物SD大鼠,体质量(250~280g),雌雄不限(合格证号:闽实动质准第002205);荷兰种豚鼠,体质量250~300g,雌雄不限,福建医科大学实验动物中心提供。1.2方法1.2.1蛇毒的分离纯化舟山眼镜蛇粗毒溶于双蒸水中,4℃静置过夜;4000r/min离心10min,取上
5、清液上SephadexG50柱(26mm×900mm),用双蒸水进行洗脱,流速20mL/h,部分收集器收集洗脱液,每管10min,测定洗脱液280nm波长处的光密度值D(280nm),绘制洗脱曲线。活性组分经浓缩脱盐后,上SephadexG100柱(26mm×900mm),洗脱过程同上。活性组分经浓缩脱盐后上离子交换凝胶CMSepharoseFF,用0.02mol/L、pH8.0的磷酸盐缓冲液(PBS)及NaCl(0.05~0.6mol/L)进行阶段性梯度洗脱,洗脱过程同上。整个分离过程均在低温层析箱内进行。1.2.2纯度鉴定参照文献6,采用SDSPAGE(Tris甘氨酸
6、系统)碱性不连续电泳,浓缩胶,T=5%,C=5%;分离胶,T=15%,C=2%。恒流29mA,整个电泳过程50min。电泳结束后,将凝胶用含50%甲醇和10%乙酸的溶液固定30min,考马斯亮蓝R250,60℃染色10min,使用30％甲醇、10％乙酸的混合液脱色。1.2.3相对分子质量测定将SDSPAGE电泳样品凝胶,在ImageMasterVDS凝胶成像系统上成像,以Marker为对照,通过该系统软件计算样品的相对分子质量。1.2.4放射受体分析法1.2.4.1制备膜受体参照文献7。大鼠断头后迅速取脑,去脑干称质量,加20倍体积冰冷的0.32mol/L蔗糖溶液冰浴手工
7、匀浆。4℃,6000r/min离心10min,取上清以4℃,15000r/min离心30min,弃上清,沉淀以50mmol/L、pH7.4的钠钾磷酸盐缓冲液洗1次,离心速度和时间同前重复1次。最后用适量缓冲液悬浮制成膜蛋白标本,-20℃贮存备用。Log/mL)和不同浓度的3HQNB(0.1~4.16nmol/L),补充50mmol/L、pH7.4的钠钾磷酸盐缓冲液至总体积1mL，此为总结合管。室温孵育30min,加入冰冷缓冲液5mL终止反应,迅速抽滤至玻璃纤维滤膜上,冲洗2次,滤膜烘干后,投入闪烁液中,用液体闪烁仪测定滤膜上的
