资源描述：
《shrnas对胃癌细胞系bgc-823胃泌素表达的抑制效应》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、shRNAs对胃癌细胞系BGC-823胃泌素表达的抑制效应第38卷第2期2007年4月解剖ACTAANAT0MlCASlNlCAVo1.38.No.2ADr.20o7shRNAs对胃癌细胞系BGC.823胃泌素表达的抑制效应丁一李军扩邢文英乐晓萍张钦宪(郑州大学医学院组织学胚胎学教研室,河南省分子医学重点实验室,郑州450052)[摘要】目的研究shRNAs对胃癌细胞系BGC一823胃泌素表达的抑制效应.方法设计4条针对胃泌素基因不同位点的寡核苷酸序列,通过体外转录法合成相应的shRNAs.以lOnmol/L
2、,20nmol/L,40nmol/L和80nmol/L的终浓度,将4条shRNAs分别转染胃癌细胞BGC一823.应用原位杂交及免疫细胞化学方法检测胃泌素表达的抑制效果,筛选最有效的shRNA.应用RT-PCR进一步验证其对胃泌素mRNA的抑制效应.应用MTI"法检测4条shRNAs在不同浓度下对BGC一823细胞的增殖抑制效应.结果转染后24h,48h及72h,胃泌素表达均被明显地抑制,并呈现浓度及时间依赖的趋势.shRNA3转染后72h,mRNA及蛋白水平表现出最佳的抑制效率,分别为(54.27±0.04
3、2)%和(41.69±0.038)%.RT-PCR结果显示,shRNA3对BGC一823细胞胃泌素mRNA的抑制率为48.1%.mT结果显示,除shRNA4处理组外,其余3组处理细胞均表现出浓度依赖性的增殖抑制趋势.结论4条shRNAs在mRNA及蛋白水平均明显地抑制了胃癌细胞BGC一823胃泌素的表达,shRNA3可能为最有效的胃泌素一shRNA.shRNA对胃泌素表达的抑制,显着降低了BGC.823细胞增殖能力.[关键词]胃泌素;shRNA;胃癌;原位杂交;逆转录一聚合酶链反应[中图分类号】R735.2[
4、文献标识码】A[文章编号]0529—1356(2007)02—182舳ITIoNEFFECTSoFVARIoUSGASTRD.shRNAsONGASTRDEXPRESSIONINGASTRICCANCERCELLLINEBGC.823DINGYi,LIJun-kuo,XINGWen-ying,LEXiao—ping,ZHANGQin-xian(DepartmentofHistologyandEmbryology,MedicalCollege,ZhengzhouUniversltr;HenanKeyLabora
5、toryofMolecularMedicalScience,Zhengzhou450052,China)lAbstract]ObjectiveTostudytheinhibitioneffectsofvariousgastrin-shNAsongastrinexpressioningastriccancercelllineBGC一823.MethodsFournucleotidesequencesofshRNAweredesignedcorrespondingtovarioussitesofgastringe
6、ne.FourshRNAsweresynthesizedbyinvitrotranscriptionandtransfectedintogastriccancercelllineBGC一823atthefinalconcentrationof10nmol/L,20nmol/L,4Onmol/Land80nmol/Lrespectively./nsituhybridizationandimmunohistochemistrytechniqueswereappliedtoinvestigatetheinhibit
7、ionofgastrinexpressionandscreenthemosteffectiveshRNA.TheinhibitoryeffectongastrinmRNAofscreenedshRNAwasfurtheridentifiedbyRT-PCR.MTI"assaywasusedtodeterminetheinhibitoryeffectof4shRNAsatvariousfinalconcentrationsonthegrowthofBGC一823cells.ResultsThegastrinmR
8、NAandproteinexressionweresuppresseddistinctly24,48,and72houmaftertransfection,andexhibitedtime—andconcentration—dependenttendency.ThehighestsuppressionemciencyonbothmRNA(54.27±0.042)%andprotein(41.69±0
