分光光度法测定刺五加茎中黄酮含量

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1、分光光度法测定刺五加茎中黄酮含量更新日期：2010-12-22点击：王丽英　宋玉萍　王淑珍　　提要　以芦丁为对照品，采用分光光度法测定刺五加茎中黄酮含量。以甲醇为溶剂连续回流提取。回归方程为A=9.4000C－0.0320，γ=0.9998(n=5)样品平均回收率为98.77%，RSD为1.34%。　　关键词　分光光度法；　刺五加茎；　含量　　刺五加茎是五加科植物刺五加Acanthopanaxsenticosus(Rupr.etMaxim)Harms的干燥茎。用分光光度法测定刺五加茎中黄酮含量，所得结果满意。1　

2、仪器与试剂　　UV-7530紫外分光光度计(上海分析仪器厂)；其它试剂均为分析纯；刺五加茎为小兴安岭野生资源。芦丁对照品由中国药品生物检定所提供(批号：080-9303)2　方法与结果2.1　实验条件的选择2.1.1　供试液制备：精密称取药材粉末2g，置索氏提取器中，加100ml石油醚脱脂2h，再用90ml甲醇提取4h，置100ml量瓶中，用甲醇定容，精密吸取25ml置50ml量瓶中用蒸馏水稀释至刻度，摇匀即得。2.1.2　标准溶液制备：精密称取在120℃减压干燥至恒重的芦丁对照品约20mg，置100ml量瓶中，

3、加甲醇约80ml，置水浴上微热溶解，放冷，加甲醇至刻度，精密量取25ml置50ml量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，即得芦丁对照液约0.1mg/ml。2.1.3　测定波长选择：精密量取芦丁对照液4ml，置10ml量瓶中，加5%NaNO2溶液0.3ml，摇匀，放置6min加10%Al(NO3)3溶液0.3ml，摇匀，放置6min加4%NaOH溶液4ml，再用30%乙醇液稀释至刻度，摇匀，放置10min置比色皿中在波长400～600nm之间测定吸收谱，确定最大吸收波长为510nm。2.1.4　稳定性实验：精密量取芦丁

4、对照液4ml，置10ml量瓶中，按2.1.3项从“加5%NaNO2溶液……再用30%乙醇溶液稀释至刻度，摇匀”操作，于510nm测定吸收度，然后每隔5min测定吸收度，观察其吸收度变化情况，结果见表1，表明最佳测定时间为显色后5～25min。表1　稳定性实验结果时间(min)吸收度A00.34250.391100.385150.384200.382250.380300.371350.3622.2　标准曲线制备：精密吸取芦丁对照液0.0，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0ml，分别置10ml量瓶中，按2.1.3

5、项从“加5%NaNO2溶液……放置10min”操作，于510nm测定吸收度，按浓度与吸收度相关关系求得回归方程为　A=9.4000　C－0.0320，γ=0.9998(n=5)显示在0.01～0.05mg/ml浓度范围内线性关系良好。2.3　精密度实验：精密量取芦丁对照液4ml，5份，按2.2法操作，测定吸收度，计算RSD=0.67%(n=5)。2.4　样品测定：按2.1.1项操作制备样品液5份，精密吸取4ml，置10ml量瓶中，2份，一份用30%乙醇液稀释至刻度摇匀做空白液；另一份按2.2项方法操作，分别测定吸

6、收度，通过△A计算平均含量为11.36mg/g，结果见表2。表2　刺五加茎黄酮含量测定结果样品号含量(mg/g)平均含量(mg/g)RSD(%)111.45211.27311.3311.360.82411.46511.272.5　加样回收实验：精密称取刺五加茎约1g，5份，分别加芦丁对照品约10mg，按2.4项操作测定吸收度，得样品平均加样回收率98.77%，RSD为1.34%，结果见表3。表3　加样回收实验结果样品号样品折算含量(mg)加入对照品量(mg)测得量(mg)回收率(%)平均回收率(%)RSD(%)1

7、11.3610.1521.3598.42211.3810.2421.2996.78311.3510.3321.6599.7198.771.34411.2910.4921.7699.98511.3710.5221.6898.003　讨论3.1　经回收率试验证明，本法具有良好的准确度和重现性。3.2　样品溶液稍带黄色进行比色时扣除此吸收度误差。作者单位:王丽英黑龙江省南岔制药厂　153100；　　　　　宋玉萍黑龙江省伊春市药检所　153000　　　　　王淑珍　黑龙江省铁力杜奇制药有限公司　152500参考文献1　中华

8、人民共和国卫生部药典委员会.中国药典(1995年版1部).广州：广东科技出版社，1995∶附录30，1732　刘重芳.银杏叶总黄酮提取工艺探讨.中成药，1992，14(7)∶73　程立方.侧柏叶总黄酮工艺与含量测定方法研究.时珍国药研究，1995，6(4)∶154　郭　澄.正交试验法优选菟丝子总黄酮提取工艺.时珍国医国药，1999，10(3)∶187