sct3024-2004 无公害食品 腹泻性贝类毒素的测定 生物法

《sct3024-2004 无公害食品 腹泻性贝类毒素的测定 生物法》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、SC/T3024—2004SC/T3024—2004无公害食品腹泻性贝类毒素的测定生物法发布时间：2004年1月7日实施时间：2004年3月1日发布单位：中华人民共和国农业部1、范围本标准规定了腹泻性贝类毒素(DSP)的测定方法—生物法。本标准适用于软体动物贝类可食部分中腹泻性贝类毒素(DSP)的测定。2、原理用丙酮提取贝类中毒素，再转移至乙醚中，经减压浓缩蒸干后，再以1％吐温-60生理盐水溶解残留物，注射小鼠，观察存活情况，计算其毒力。3、试剂和材料3.1丙酮(分析纯)。3.2乙醚(分析纯)。3.31％吐温-60生理盐水：称取1.

2、0g吐温-60，溶于生理盐水(0.8％NaCl)中，并定容至100.0mL。4、仪器和设备4.1旋转蒸发器。SC/T3024—20044.2均质器。4.3磨口烧瓶：圆底，500mL、100mL。4.4布氏漏斗：Ф100mm。4.5分液漏斗：具塞，500mL。4.6天平：感量0.1g。4.7刻度试管：10mL，具塞。4.8冰箱：0℃～5℃和－15℃～－20℃。4.9注射器：1mL。4.10注射器针头：8＃。4.11小鼠：体重为16g～20g的健康ICR系雄性小鼠。5、检样的制备5.1生鲜带壳的贝类a)用清水彻底洗净贝类外壳，开壳，用清

3、水淋洗内部去除泥沙及其他外来杂质，仔细取出贝肉，切勿割破肉体；b)收集贝肉，沥水5min，捡出碎壳等杂物，迅速冷冻，贮藏备用；c)注意不要破坏闭壳肌以外的组织，尤其是中肠腺(又称消化盲囊，组织呈暗绿色或褐绿色)。开壳前不能加热或用麻醉剂。5.2冷冻贝类在室温下，使冷冻的样品(带壳或去壳的)呈半冷冻状态，按5.1方法清洗、开壳、淋洗、SC/T3024—2004取肉。5.3取样a)可以切取中肠腺的贝类(扇贝、贻贝、牡蛎等)，称取200g贝肉后，仔细切取全部中肠腺，将中肠腺称重后细切混合作为检样，注意不要使中肠内容物污染案板；b)对于尚未

4、确定部位毒性的贝类及不易切取中肠腺的小型贝肉，可将全部贝肉细切、混合，作为检样；c)为避免毒素的危害，应戴手套进行检验操作，移液管等用过的器材应在5％的次氯酸钠溶液中浸泡1h以上，以使毒素分解；废弃的提取液等也应用5％的次氯酸钠溶液处理。6、提取6.1取5.3a)处理的中肠腺，或5.3b)www.bzfxw.com处理的200g贝肉置于均质杯内，均质2min。6.2加3倍量丙酮，与样品充分搅拌均匀后，用布氏漏斗抽滤并收集提取液。对残渣以检样两倍量丙酮再次抽滤两次，合并抽滤液。6.3将抽提液移人500mL的磨口烧瓶中，减压浓缩(旋转蒸

5、发器，56℃)去除丙酮，直至在液体表面分离出油状物。6.4将浓缩液移入分液漏斗内，以100mL～200mL乙醚和少量的水洗下粘壁部分，轻轻振荡(不能生成乳浊液)，静置分层后，去除水层(下层)，用相当乙醚半量的蒸馏水洗乙醚层两次，再将乙醚层移人250mL的磨口烧瓶中，减压浓缩(旋转蒸发器，35℃)去除乙醚。6.5以少量乙醚将浓缩物移人100mL磨口烧瓶中，再次减压浓缩去SC/T3024—2004除乙醚。6.6以1％吐温－60生理盐水将全部浓缩物在刻度试管中稀释到10mL。此时1mL试液相当于20g去壳贝肉的重量，以此悬浮液作为试验原液

6、。6.7以试验原液注射小鼠，24h内3只均死亡时，需将试验原液进一步稀释，再注射小鼠。稀释前，应先振荡使溶液成均匀悬浮液，再取部分试液以1％吐温－60生理盐水稀释。7、小鼠试验7.1以振荡器使试液或其稀释液成为均匀的悬浮液。7.2将每只小鼠称重，每三只小鼠为一组，分别将1mL试液注射到小鼠腹腔中。7.3同时，另取三只小鼠作为对照组，注射www.bzfxw.com1mLl％吐温－60生理盐水于腹腔中。7.4观察自注射开始到24h后的小鼠存活情况，求出一组三只中死亡两只及两只以上的最小注射量。7.5小鼠注射腹泻性贝毒后的症状为运动不活泼

7、，大多呼吸异常，致死时间长。8、结果计算和表述8.1毒力的计算使体重16g～20g的小鼠在24h死亡的毒力为1个小鼠单位(MU)。样品中DSP毒力的计算，按表1选择24h内死亡两只及两只以上鼠的最小注射量及最大稀释倍数进行计算。SC/T3024—20048.2注射量与毒力的关系注射量与毒力的关系见表1。表1注射量与毒力的关系ag试验液注射量mL检样量毒力MU/g原液1.0200.05原液0.5www.bzfxw.com100.12倍稀释液1.0100.12倍稀释液0.550.24倍稀释液1.050.24倍稀释液0.52.50.48倍

8、稀释液1.02.50.48倍稀释液0.51.250.816倍稀释液1.01.250.816倍稀释液0.50.6251.6a以中肠腺为检样时，相当于含有中肠腺的去壳贝肉量。SC/T3024—2004附录A(资料性附录)本标准与日本厚生省