药物在大鼠主动脉组织及其培养细胞的细胞膜色谱研究

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1、药物在大鼠主动脉组织及其培养细胞的细胞膜色谱研究【摘要】目的比较细胞膜色谱法中细胞膜固定相的特异性。方法分别构建大鼠主动脉组织匀浆细胞膜固定相和培养大鼠主动脉平滑肌细胞膜固定相。用细胞膜色谱法研究10种αAR激动剂和拮抗剂的生物亲和作用，测定其容量因子并进行相关性分析。结果10种药物在大鼠主动脉组织和培养大鼠主动脉平滑肌细胞膜固定相上容量因子之间存在正相关关系，相关系数r=0.923，有极显著性意义(P<0.01)。结论用培养的细胞制备细胞膜固定相具有更高的特异性，可提高药物的保留时间，也可用于药物的高效初

2、筛。【关键词】细胞膜色谱α肾上腺素受体　　ABSTRACT:ObjectiveToparethespecificitiesofthecellmembranestationaryphases(CMSP)embranechromatography(CMC).MethodsCellchromatographiccolumnsoothmusclecells.Thenthechromatographicaffinitiesoftenligandsofαadrenergicreceptor(αAR)atographicc

3、olumnsatographicparameter,oothmusclecellCMSP,provingthespecificityoothmusclecell,theenhancedCMCmethodiscapableofaffinitiesforevaluatingligandreceptorsordrugscreening.　　KEYC)是研究受体与药物相互作用的新型亲和色谱技术，将高效液相色谱、细胞生物学与受体药理学相结合，利用药物与膜受体间存在的特异性亲和力，成功地将药物体内的作用过程在色谱柱内进行动态

4、模拟[14]。CMC法与放射性配体结合法和受体功能分析方法的相关性研究证明，三种方法得到的配体及其异构体对M、α、β受体亲和力顺序基本相同，并具有明显的相关性[57]。为了研究组织器官和培养细胞制备的细胞膜固定相(cellmembranestationaryphrase,CMSP)的异同，本次实验将CMC法与细胞生物学方法相结合，用大鼠主动脉组织和其培养细胞CMC法研究了10种不同αAR激动剂与拮抗剂的生物亲和作用。比较了传统的CMC法(CMSP为组织细胞膜)与改进后的CMC法(CMSP为培养细胞)的特异性和

5、相关性。建立了大鼠主动脉平滑肌培养细胞的CMC模型。　　1材料与方法　　1.1药品和试剂羟甲唑啉(Oxymetazoline296.84)、5甲基乌拉地尔(5methylurapidil,5MU401.5)购自RBI公司；RS17053(449)购自RocheBioscience；去甲肾上腺素(Norepinephrine319.3)、哌唑嗪(Prazosin419.9)、酚妥拉明(Phentolamine317.8)、苯肾上腺素(Phenylephrine203.7)、甲氧明(Methoxamine247

6、.7)、育亨宾(Youhimbin390.9)、BMY7378(458.4)购自Sigma公司。DMEM干粉培养基(GIBCO公司)、小牛血清(杭州四季青公司)、胰蛋白酶(Sigma公司)、磷酸二氢钠(NaH2PO4)、磷酸氢二钠(Na2HPO4)、NaCl、盐酸(HCL)、磷酸(H3PO4)、乙醇(C2H5OH)等均为国产分析纯。　　1.2实验动物SD大鼠3只，体重100-150g，雌雄不拘，年龄2-3个月。由西安交通大学医学院实验动物中心提供。　　1.3仪器Gilson高效液相色谱系统，包括370泵、115型紫

7、外检测器、7725型手动进样阀(美国Rheodyne公司)和Anastar色谱工作站(奥泰科技有限公司)；HERMLEZK410型低温冷冻高速离心机(德国)；AS5150A超声振荡仪(AutoScience公司)；PHS2D型酸度计(上海第二分析仪器厂)；ShimadzuTB85型循环水浴(瑞士)。　　1.4方法　　1.4.1大鼠主动脉组织细胞膜制备取两只SD大鼠，颈椎脱臼处死，迅速开胸，取出主动脉，置于冷的生理盐水中，清洗数次，洗净余血，用锋利眼科剪除去主动脉壁周围的脂肪及结缔组织。将主动脉在匀浆管中剪碎，

8、加入10倍量冷生理盐水，制备匀浆。制得的匀浆在400×g离心10min，弃去沉淀，上清液10000×g离心10min。沉淀再以生理盐水反复洗涤离心，直至沉淀为均匀的乳白色，然后加入一定量的低渗液，超声振荡20min，12000×g离心10min，弃去上清液，沉淀即为所需主动脉细胞膜。上述操作均在0-4℃下进行。　　1.4.2大鼠主动脉组织色谱柱的制备取经活化