乳腺癌中线粒体基因组d环区基因突变的研究论文

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1、乳腺癌中线粒体基因组D环区基因突变的研究论文焦飞常峰马颖刘长福谢书阳【摘要】通过检测乳腺癌基因组D环区体细胞突变和种系性变异，探讨其与乳腺癌发生的关系。方法提取24例乳腺癌患者癌、癌旁组织及外周血细胞总DNA，PCR扩增各组织线粒体DNA(mitochondrialDNA,mtDNA)基因组D环(Dloop)，基因测序后与线粒体文库中的剑桥序列比对，分析突变类型。结果在24例乳腺癌组织中，共发现91个种系性变异，11例(45.8%)肿瘤发现体细胞突变共19例次，36.8%位于第一高变区.freeltDNAD环区具有高度多态性和高度突变率，该区的碱基改变在乳腺

2、癌的形成中可能起重要作用。【关键词】乳腺肿瘤线粒体DNA突变多态性【Abstract】ObjectiveToinvestigatethepotentialroleofmitochondrialDNAmutationsintumorigenesisofbreastcancerandtoanalyze,somaticmutationsandpolymorphismsofmitochondrialDloopregioninbreastcancer.MethodsTheDloopofmitochondrialDNAintumorsamples,pairednorm

3、altissuesandperipheralbloodsamplesplifiedbyPCRandsequenced.ThesequencesbridgesequencereportedinMitomaptoanalyzethemutationtypes.ResultsNiyonegermlinevariationsors.Eleventumors(45.8%)presentedsomaticmtDNAmutationsongthem,36.8%and52.6%ent1and2respectively.ConclusionMitochondrialDNAD

4、loophashighpolymorphismsandhighsomaticmutations.Thevariantsoftheregionmightplayanimportantroleintumorgenesisofnormalbreasttissue.【Key,mitochondrialDNA,mutation,polymorphism线粒体与肿瘤发病关系的研究,可追溯到20世纪70年代以前,但过去的研究主要集中在肿瘤细胞线粒体的形态和能量代谢等方面,随着研究的深入已经证实，线粒体可参与细胞的多种生命过程［1］。自从Polyak［2］发现结直肠癌中mtD

5、NA基因型的变化以来,mtDNA突变和肿瘤的发生的关系成为近年研究的热点,并且在多种肿瘤中都发现了mtDNA的突变［35］。Dloop区主要由重链复制的起始区(OH)﹑轻链启动子(LSP)﹑重链启动子(HSP)﹑保守序列片段(CSBⅠ、CSBⅡ、CSBⅢ)和终止结合序列(TAS)组成,.freeltDNA的Dloop区突变进行检测和分析,可为乳腺癌病因学的研究提供实验依据,并为临床乳腺癌的诊断和治疗提供参考。1材料与方法1.1标本来源搜集24例经病理证实的乳腺导管细胞癌患者的肿瘤组织，癌旁组织为距肿瘤组织边缘5cm以外的周围正常组织,病理切片光镜下

6、未见肿瘤细胞,正常对照为患者经枸橼酸钠抗凝的相应外周血标本。24位患者均为女性，年龄31～69岁，中位年龄52岁。1.2主要试剂E.N.Z.A组织DNA盒(TissueDNAkit)(Omega),E.N.Z.A血液DNA盒(BloodDNAkit)(Omega),TakaraPremixTaq(Takara)，其它化学试剂均为国产分析级。1.3DNA抽提用E.N.Z.A组织和血DNA提取试剂盒分别提取乳腺癌组织及其相应外周全血标本和正常对照的外周全血标本的细胞总DNA。1.4PCR扩增及序列测定引物序列分别为:上游引物F1:5’GAATCGGAGGACAA

7、CCAGTA3’,下游引物R1:5’TGATGTGAGCCCGTCTAAAC3’。它们分别位于mtDNACytb和12SrRNA基因区内,扩增包括1122bp控制区序列在内的1450bp片段。在PCR反应管中依次加入下列物质:TakaraPremixTaq25μl,上游引物1μl,下游引物1μl,模板DNA2μl,双蒸水补足至终体积为50μl。PCR扩增:94℃预变性5min；94℃变性1min,55℃退火1min,72℃延伸2min,32个循环；72℃延伸10min。扩增产物5μl经1%琼脂糖凝胶电泳90V电压下,60min有目的条带出现后于ABIPr

8、ism377测序仪(美国PE公司生产)