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1、【专题讨论】生物制药产业化及膜分离技术，下游纯化解决方案专帖！请教一个关于超滤浓缩疫苗(病毒)的问题，目标病毒是20~22nm，但是超滤膜是以kd表示的，不知道nm和kd对应关系如何，我应该选用多大截留分子量的膜包合适啊。谢谢前辈指导。A:你可以考虑用截流分子量为100kDa的超滤膜，对于疫苗应该没问题。另外，还应该看杂质的种类和大小。B:一般地，浓缩疫苗，选择的原则是100KD和300KD为多。更大的500KD和900KD也有用，但是很少。至于换算，粗略的是1nm对应9~11KD。但是您最好是以实验为准。血清培养细胞,一蛋白由35kd的轻链和40kd的重链组成的二条异源性二聚体，由多个二硫
2、键连接。等电点介于pH4.5～pH5.5。请教应该采用何种方法分离纯化?含血清的培养，会受血清中多种杂蛋白影响，纯化难度较大。不知道你的表达量有多少，血清百分之几？可以考虑阴离子capture，但是注意phenolred,核酸以及多种杂蛋白都会binding，所以要先建立比较灵敏的assay方法，如Elisa，用于监测纯化整个过程。目标蛋白等电点和BSA相差不多，第一步很可能分不开，后面可以考虑用HIC进行精纯。我的建议是先得到澄清液体，然后用切向流去除小分子杂质，然后层析分离。为保证二聚体不解离，二硫键不断裂，建议整个过程考虑pH值，还有还原剂。haibei00wrote:血清培养细胞,一
3、蛋白由35kd的轻链和40kd的重链组成的二条异源性二聚体，由多个二硫键连接。等电点介于pH4.5～pH5.5。请教应该采用何种方法分离纯化?对于血清培养细胞，可以先考虑用盐析沉淀进行粗提后，再用凝胶过滤和阴离子交换柱，如QSepharoseFF或DEAESepharoseFF进行分离。ligandwrote:你可以考虑用截流分子量为100kDa的超滤膜，对于疫苗应该没问题。另外，还应该看杂质的种类和大小。一般的疫苗用100K应该没有问题。但是对于这么小的病毒，用100K，可能会影响回收率。建议实验后决定孔径选择。ligandwrote:对于血清培养细胞，可以先考虑用盐析沉淀进行粗提后，再用
4、凝胶过滤和阴离子交换柱，如QSepharoseFF或DEAESepharoseFF进行分离。这样做肯定没有问题。但是下游纯化是生物技术的主要成本所在（90%？，95%？更多？）。如何使填料的寿命延长以减少成本，是我们工艺选择时候考虑的。有些时候，多个步骤可能会更有利于获得理想结果。如果要是实验室研究，那是另外一回事。盐析要考虑条件。别把目标蛋白一起去了。是与否，请参考。我们用PVDF0.22um的滤芯过滤培养液，用后总是清洗不干净，听说不能用碱洗，我们又打算反复使用，希望大家给一个过滤器清洗建议吧。我们的产品是蛋白或者抗生素.羟丙甲纤维素药液过滤问题：我们曾尝试1微米和5微米预过滤器的过滤,
5、结果很快就堵住了，过不了,急啊。各位前辈能给点建议吗,非常感谢!!!0.5%羟丙甲纤维素、0.5%氯化钠.动力黏度（用平氏黏度计测）范围为10—32mpawarmice1wrote:我们用PVDF0.22um的滤芯过滤培养液,用后总是清洗不干净,听说不能用碱洗,我们又打算反复使用,希望大家给一个过滤器清洗建议吧.我们的产品是蛋白或者抗生素.可以15min用碱（0.2M)清洗。然后迅速用水洗干净。swordhearterwrote:羟丙甲纤维素药液过滤问题：我们曾尝试1微米和5微米预过滤器的过滤,结果很快就堵住了，过不了,急啊。各位前辈能给点建议吗,非常感谢!!!0.5%羟丙甲纤维素、0.5%
6、氯化钠.动力黏度（用平氏黏度计测）范围为10—32mpa以下几点建议：1，选择合适的过滤器；2，根据过滤器的使用条件选择合适的压力。3，欲速则不达。粘度很大的料液，不能要求太快，或者加大使用面积。warmice1wrote:888老师.谢谢!我们试过,但是通量下降.您方便详细描述一下？我们用碱清洗后,发现PVDF滤膜过料液变得很慢.warmice1wrote:我们用碱清洗后,发现PVDF滤膜过料液变得很慢.你描述还是很简单.过滤器除了滤膜的材质之外,还有支撑层,保护支架,尖头,封口等.各部位的材质是不一样的.如果用碱清洗-------大多数是这么处理的.不能长时间浸泡.不同的厂家生产的产品是
7、不一样的.所以不能一概而论.你还是需要详细的说明.我在毕赤酵母里分泌表达的一个融合蛋白存在降解，加PMSF和EDTA都不能抑制降解，而且上清存放-20一段时间仍会继续降解，在做纯化过程中也会出现一系列降解的连续条带，实在太郁闷了，有人遇到过类似情况吗？大家有什么应付降解的良策吗？希望大家给些建议。谢谢！printmyheartwrote:我在毕赤酵母里分泌表达的一个融合蛋白存在降解，加PMSF和EDTA都不能
