基于its序列分析铁皮石斛试管苗的亲缘关系

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1、基于ITS序列分析铁皮石斛试管苗的亲缘关系顾慧芬1，庄意丽1，梅其春2（1.上海市中药研究所上海201203；2.复旦大学生命科学学院上海200433）摘要：采用分子系统学方法分析铁皮石斛试管苗及其近缘种的遗传多样性，为准确进行基源鉴定、阐明属内的种间关系及发现新的药用资源提供分子证据。采集三十多种石斛样品分离提取DNA，PCR扩增ITS区及5.8SrDNA完整序列并测序，用Mega3.1软件进行系统学分析。采用邻接法和最大简约法分析铁皮石斛试管苗亲缘关系，对三十多种石斛类植物的ITS区序列进行分析，两种方法得到的系统树基本一致。ITS序列在石斛种间存在

2、极其显著的差异，铁皮石斛与其它各种石斛均有各自特异性的序列位点，树状图显示铁皮石斛试管苗与野生铁皮石斛源于同一物种，而石斛属其它种与这两种遗传关系较远。关键词：铁皮石斛试管苗；ITS序列；系统发育；亲缘关系所属专业：生化与生物技术药物ThePhylogeneticRelationshipsofTissueCultureSeedlingsofDendrobiumcandidumBasedonEvidencesfromITSSequencesGUHui-fen1，ZHUANGYi-1i1，MEIQi-chun2(1．ShanghaiInstituteofCh

3、ineseMateriaMedica，Shanghai201203，China；2．SchoolofLifeSciences，FudanUniversity，Shanghai200433，China)Abstract：MolecularsystematictechniqueswereappliedtorevealthegeneticdiversityofmedicinalplantofDendrobiumcandidumandtheirrelatedspeciesinDendrobium.Theinternaltranscribedspacer(ITS)

4、aswellas5.8SrDNAsequencesofmorethan30samplesofDendrobiumwereamplifiedusingPCRmethodandsequenced．Mega3.1wasusedtoanalyzethegeneticdiversitywithingenus.PhylogeneticrelationshipsamongspeciesinDendrobiumandtissuecultureseedlingsofDendrobiumcandidumasoutgroupwereestimatedbymaximumpars

5、imonyandneighbor—joiningmethodswithMega3.1software，andsimilarITStreeswereobtainedwiththetwomethods.TheresultsofphylogeneticanalysisalsoindicatethatthetissuecultureseedlingsofDendrobiumcandidumhasaclosedrelationshipwithDendrobiumcandidum,whilebothDendrobiumcandidumandtissueculture

6、seedlingsofDendrobiumcandidumarethemostdistanttotheotherspeciesofDendrobium.Keywords：tissuecultureseedlingsofDendrobiumcandidum；ITSsequence；phylogeny；relationship铁皮石斛（DendrobiumcandidumWall.exLindl），为兰科（Orchidaceae）石斛属（DendrobiumSw.）多年附生草本，是我国传统名贵中药之一，为石斛之上品，具有润喉消毒、生津益胃、清热养阴等功效。药

7、理研究显示铁皮石斛是一类很有价值的中药类免疫增强剂[1]-[2]，临床上也广泛的用于肿瘤病人手术及化疗后的辅助治疗。随着铁皮石斛研究的不断深入，市场对铁皮石斛的需求也不断增大。近年来通过无性繁殖即组织培养培植试管苗，获得了成功，实现了资源的可持续开发和利用。药用植物在采用组织培养等进行繁殖和人们在栽培的过程中，由于改变了其生态环境和人类的干扰，其遗传特性等方面是否会发生变化，也是人们关注的问题之一。随着分子生物技术的迅速发展，DNA分子标记技术在中药鉴定方面的应用已取得了许多进展[3]-[10]。由于rDNA的ITS区域具有较多的碱基变异信息，在长度上具

8、有较好的保守性，因此近10年来被广泛地用于植物属间与种间系统关系的研究。ITS之