snt 2051-2008 食品、化妆品和饲料中牛羊猪源性成分检测方法 实时pcr法

《snt 2051-2008 食品、化妆品和饲料中牛羊猪源性成分检测方法 实时pcr法》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛犖／犜２０５１—２００８食品、化妆品和饲料中牛羊猪源性成分检测方法实时犘犆犚法犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳犫狅狏犻狀犲，狅狏犻狀犲，狆狅狉犮犻狀犲犱犲狉犻狏犲犱犿犪狋犲狉犻犪犾狊犻狀犳狅狅犱，犮狅狊犿犲狋犻犮犪狀犱犳犲犲犱—犚犲犪犾狋犻犿犲犘犆犚犿犲狋犺狅犱２００８０４２９发布２００８１１０１实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局犛犖／犜２０５１—２００８前言本标准的附录Ｆ为规范性附录，附录Ａ、附录Ｂ、附录Ｃ、附录Ｄ、附录Ｅ为资料性附录。本标准由

2、国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国辽宁出入境检验检疫局、宝生物工程（大连）有限公司、中国检验检疫科学研究院。本标准主要起草人：曹际娟、李晶泉、郑秋月、于爱丽、陈颖、姚珊、谢琰。本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。Ⅰ犛犖／犜２０５１—２００８食品、化妆品和饲料中牛羊猪源性成分检测方法实时犘犆犚法１范围本标准规定了食品、化妆品和饲料中牛、羊（绵羊和山羊）、猪源性成分实时ＰＣＲ检测方法。本标准适用于食品、化妆品和饲料中牛、羊（绵羊和山羊）、猪源性成分的鉴别检测。２规范性引

3、用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。ＧＢ／Ｔ６６８２分析实验室用水规格和试验方法（ＧＢ／Ｔ６６８２—１９９２，ｎｅｑＩＳＯ３６９６：１９８７）ＧＢ１９４８９实验室生物安全通用要求３术语和定义、缩略语下列术语和定义、缩略语适用于本标准。３．１术语和定义３．１．１牛源性成分犫狅狏犻狀犲犱

4、犲狉犻狏犲犱犿犪狋犲狉犻犪犾狊牛种属特异性ＤＮＡ片段。３．１．２羊源性成分狅狏犻狀犲犱犲狉犻狏犲犱犿犪狋犲狉犻犪犾狊羊种属特异性ＤＮＡ片段。３．１．３猪源性成分狆狅狉犮犻狀犲犱犲狉犻狏犲犱犿犪狋犲狉犻犪犾狊猪种属特异性ＤＮＡ片段。３．１．４实时荧光犘犆犚狉犲犪犾狋犻犿犲犳犾狌狅狉犲狊犮犲狀狋犘犆犚实时荧光聚合酶链式反应。３．１．５犆狋值犆狔犮犾犲狋犺狉犲狊犺狅犾犱犆狋每个反应管内的荧光信号达到设定的阈值时所经历的循环数。３．２缩略语３．２．１犇犖犃犱犲狅狓狔狉犻犫狅狀狌犾犲犻犮犪犮犻犱脱氧核糖核酸。

5、３．２．２犘犆犚狆狅犾狔犿犲狉犪狊犲犮犺犪犻狀狉犲犪犮狋犻狅狀聚合酶链式反应。１犛犖／犜２０５１—２００８３．２．３犜犪狇犜犺犲狉犿狌狊犪狇狌犪狋犻犮狌水生栖热菌。３．２．４犉犃犕６犮犪狉犫狅狓狔犳犾狌狅狉犲狊犮犲犻狀６羧基荧光素。３．２．５犚犗犡５犮犪狉犫狅狓狔犡狉犺狅犱犪犿犻狀犲６羧基Ｘ罗丹明。３．２．６犎犈犡５犺犲狓犪犮犺犾狅狉狅犳犾狌狅狉犲狊犮犲犻狀６羧基２′，４，４′，５′，７，７′六氯荧光素。３．２．７犆犗犡Ⅰ犆狔狋狅犮犺狉狅犿犲犆狅狓犻犱犪狊犲狊狌犫狌狀犻狋Ⅰ细胞色

6、素Ｃ氧化酶亚单位Ⅰ。４原理本标准采用ＴａｑＭａｎ实时荧光ＰＣＲ技术，根据线粒体ＤＮＡ（ＣＯＸⅠ）基因上动物种间多态性的差异而进行动物源性种类鉴定。本标准应用多色荧光检测技术，采用多重ＰＣＲ方法。牛、羊、猪源性成分单体系检测时，对反应液中含有的两种不同荧光染料进行双通道同步检测，在同一反应管内对牛或羊或猪的ＣＯＸⅠ基因及内参照反应同时进行扩增，并通过标记两种不同荧光物质（ＦＡＭ、ＨＥＸ）的特异性探针进行特异性杂交，两色荧光同步检测；牛羊源性成分混合体系检测时，对反应液中含有的三种不同荧光染料进行三通道同步检

7、测，在同一反应管内分别对牛、羊特异的ＣＯＸⅠ基因及内参照（ＩｎｔｅｒｎａｌＣｏｎｔｒｏｌ）同时进行扩增，并通过标记三种不同荧光物质（ＦＡＭ、ＨＥＸ、ＲＯＸ）的特异性探针进行特异性杂交，多色荧光同步检测。其中，对内参照反应的检测，可以监控反应是否正常进行，防止假阴性结果。５材料与试剂５．１设备和材料５．１．１实时荧光ＰＣＲ检测系统。５．１．２高速台式冷冻离心机（最高转速１２０００ｒ／ｍｉｎ以上）。５．１．３台式离心机（最高转速２０００ｒ／ｍｉｎ）。５．１．４振荡器。５．１．５冰箱（２℃～８℃和－２０℃或－８

8、０℃）。５．１．６微量可调移液器及配套吸头（１０μＬ、１００μＬ、１０００μＬ）。５．１．７实时荧光ＰＣＲ反应管。５．１．８离心管。５．１．９水浴槽。５．１．１０加热器。５．１．１１可移动紫外灯。５．１．１２磁力架。５．２试剂除特别说明以外，所用试剂均为分析纯，水为按照ＧＢ／Ｔ６６８２规定的一级水。所有试剂均用无ＤＮＡ酶污染的容器分装。２犛犖／犜２０５１—２００８５．２．１基因组ＤＮＡ提取试剂盒１）：组成、功能及使用注意事项参