一种农杆菌介导稻瘟病菌遗传转化

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1、第35卷第5期植物保护学报V01．35No．52008年10月ACTAPHYTOPHYLACICAsTNICAOct．2008一种农杆菌介导稻瘟病菌的遗传转化吴毅歆1’2范成明1周惠萍1久保康之3何月秋h(1．云南农业大学农业生物多样性与病虫害控制教育部重点实验室，昆明650201；2．云南省农业科学院经济作物研究所，昆明650205；3．日本京都府立大学农学部植物病理实验窜，京都606-8522，日本)摘要：以农杆菌c58c1及携带潮霉素抗性的质粒pBlG2RHPH2为介导，以广泛不致病的野生型稻瘟病菌cY2为出发茵株，开展稻瘟

2、病菌T—DNA插入转化条件的研究。农杆菌OD咖为o．1条件下，乙酰丁香酮(As)200¨moL／L，用IM培养基(pH5．2)共培养。结果表明，在潮霉素、头孢噻肟钠和壮观霉素为200仙g／mL，2mm滤纸条筛选培养，转化效率最高，平均可获得329．O个转化子／1×104个孢子。通过对转化子的继代稳定性和PCR检测，证明转化子均获得了T．DNA插入片段，且能稳定遗传。采用接种法，在不同遗传背景的44个抗稻瘟病的水稻近等基因系接种8000个转化子，获得20个致病突变体。关键词：稻瘟病菌；农杆菌介导遗传转化；T—DNA插入突变Agene

3、ticoftransfbrmationof撇，z印D，?咖PJ呈ir豇口口byAg加易口c缸一Mm伽m吃廓cfP疗sWuYixinl'2FanChengmin91ZhouHuipin91YasuyukiKub03HeYueqiul’(1．KeyLabomtoryofA加culturalBiodiversityandPestsContml，MinistryofEducation，Yunn册A鲥culturalUniversity，Kunming650201，YunnanPr；0vince，China；2．C鸽hCropResearc

4、hInstitute，Yun∞nAcademy0fA甜culturalSciences，Kunming650205，YunnallProvince，China；3．L血omtoryofPl帅tPathology，FacultyofAgnculture，KyotoPh伯ctumlUniversit)r，Kyoto606—8522，J印锄)Abstract：T—DNAinsertionaltransfomationsyS_temofauniversalnon—pathogenicM昭m妒on娩g哦eoiso—lateCY2，wasim

5、provedwitll月驴6cLcfe矗M，n￡M，咖c如，堪strainC58Clcan了ingplasmidpBIG2RHPH2harboringthehygromycinBgene．Theresultshowedthattotal329t啪sfo咖ntscouldbeobtainedperl×104sporeswhenC58Clwas0．1at0D600，inductionmediumwit}lpH5．2containingacetosy—ngoneat200斗moL／L，selectionmediumcontaining2

6、00¨g／mLofhygromycinB，cefotaximesodiumandspectino-mycineachand2mm埘defilterpaperstripewereused．ThetransfomlantswerestablewhentheygrewonCMmediumwithouthygromycinB五吖5timesandweI．eVel证iedwithPCRampli6cationbasedontheprimerpairsofthehygmmycinresistancegene．Byartificialinocu

7、lationon44near-isogeniclineswithdif-ferentback挈舯unds，20pathogenicmutantswereisolatedoutof8000transfonIlant8．Keywords：肘皑田叩。疗kg慨∞；伽60c把^Mm—mediatedtransf0彻ation；T-DNAinsenionalmutagenesis基金项目：农业部“948”项日(2006．G61)，国家科技部“863”计划(2002AA245041)作者简介：吴毅歆，女，1968年生，副研究员，研究方向为分子植

8、物病理，email：w”680705@sina．com}通讯作者(Authorfor∞n℃spondence)，email：heyueqiu@tom．com收稿日期：2008—05—28植物保护学报35卷基因插入失活获得能够覆盖全基因组的突变体库是