snt 1749-2006 鲜乳中菌落总数快速测定 阻抗法

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1、S“中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T1749-2006鲜乳中菌落总数快速测定阻抗法Rapiddetectionofaerobicbacterialcountinrawmilk-Impedancemethod2006-01-26发布2006-08-16实施中华人民共和匡国家质量监督检验检疫总周SN/T1749-2006前.J.曰本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位:中华人民共和国广东出人境检验检疫局。本标准主要起草人:高东微、李志勇、易敏英。本标准系首次发布的出人境检验检疫行业标准。SN/T174

2、9-2006鲜乳中菌落总数快速测定阻抗法范围本标准规定了鲜乳中菌落总数的阻抗快速测定方法。本标准适用于各类鲜乳菌落总数的测定。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T4789.2-2003食品卫生徽生物学检验菌落总数到定GB/T4789.18-2003食品卫生徽生物学检验乳与乳制品检验3术语和定义

3、下列术语和定义适用于本标准。3.1鲜乳rawmilk从正常饲养的、无传染病和乳房炎的健康哺乳动物乳房内挤出的正常乳房分泌物，无添加物且未从其中提取任何成分。3.2菌落总数aerobicbacterialcount按GB/T4789.2-2003中3.1的规定。3.3阻抗测定时间impedancedetecttime,DT由于微生物活动引起培养基中阻抗变化至能被仪器检侧记录的时间，简称DT,4原理微生物生长代谢将培养基中蛋白质和碳水化合物转变为氨基酸及乳酸等，引起培养基电阻抗微弱变化，可由阻抗检测仪器记录成DT值。DT值与样品微生物

4、污染程度在一定范围内存在相关关系。建立DT值与菌落总数之间的标准曲线及回归方程。利用该标准曲线和回归方程，并通过测定样品DT值，计算出样品菌落总数。5设备和材料阻抗检测器:BACTOMETER.M64或M128，或具有同等检测功能的其他阻抗检测器。5.2反应池:用于制备反应板，配套阻抗检测器使用。5.3微量移液器:20p.L-200IiL,5.4Tip头:配套微量移液器使用。5.5其他设备和材料:按GB/T4789.2-2003中第4章和GB/T4789.18-2003中第3章的规定。SN/T1749-20066培养墓和试荆6.1

5、改良营养琼脂培养墓(MPCA)6.1.1成分改良营养琼脂培养基(MPCA)54g蒸馏水1000mL6.1.2制法将上述成分配好，加热煮沸溶解，分装后121C高压灭菌15min,6.2其他培养基和试荆按GB/T4789.2-2003中第5章的规定。7反应板7.1反应板的制备无菌操作，在反应池中每孔加人1.0mL经沸水浴加热融化的改良营养琼脂培养基或营养琼脂培养基，静置至冷凝固化。制好的反应板用塑料袋封好并贮冰箱冷藏格内，宜于15d以内使用。反应板使用前从冰箱取出并先恢复至室温再做实验。7.2反应板的使用利用反应板对检样进行培养和阻抗

6、测定，按照8.3的操作步骤进行。反应板中的每个反应板孔为一次性使用。如果一次检测未能使用完一块反应板中全部的反应板孔，可在检测结束后将该反应板重新贮冰箱冷藏格内，尚未使用的反应板孔可在下次检测时使用。全部反应板孔均使用后，反应板121C高压灭菌15min后丢弃。日操作步骤以BACTOMETE妙为例。其他阻抗检测器按照仪器操作说明进行操作。8.1标准曲线的绘制和预测方程的建立8.1.1标准曲线的绘制8.1.1.1制备鲜乳标准品8.1.1.1.1取奶场未经任何加工处理的新鲜鲜乳作为污染程度高的标准品，取经过加热或冷却加工处理的新鲜鲜乳

7、作为污染程度低的标准品。8.1.1.1.2按照不同比例，混合污染程度高的标准品和污染程度低的标准品，得到一系列污染程度从高到低不同的鲜乳标准品。8.1.1.2采集标准曲线的数据点8.1.1.2.1对系列污染程度不同的鲜乳标准品分别进行平板菌落计数，培养温度30℃士1C，其余按GB/T4789.2-2003,8.1.1.2.2同时对系列污染程度不同的鲜乳标准品分别按照8.3的操作步骤进行阻抗测定，培养温度30℃士1C，记录各标准品DT值。8.1.1.3绘制标准曲线以系列鲜乳标准品阻抗测定DT值(h)为横坐标，以相应平板菌落计数结果(

8、cfu/mL)的对数为纵坐标，利用阻抗检测器内置程序自动绘制标准曲线。标准曲线的数据点应不少于200个并在标准曲线上分布均匀。数据点对应的平板菌落计数结果应覆盖至少5个一6个数量级，并包含该类鲜乳菌落总数容许限量。8.1.2预测方程的建立8.1.2