snt 1198-2003 马铃薯中转基因成分定性pcr检测方法

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1、SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T1198-2003马铃薯中转基因成分定性PCR检测方法Protocolofthepolymerasechainreactionfordetectinggeneticallymodifiedcomponentsinpotatoes2003-03-17发布2003-09-01实施中华人民共和匡国家质量监督检验检疫总IRSN/T1198-2003前言本标准的附录A为资料性附录.本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位:中华人民共和国山东出人境检验检疫局

2、。本标准主要起草人:高宏伟、梁成珠、张艺兵、权洁霞。本标准系首次发布的检验检疫行业标准。SNIT1198-2003马铃薯中转基因成分定性PCR检测方法范圈本标准规定了马铃薯中的转基因成分的定性PCR检测方法。本标准适用于转基因马铃薯品种(NEWLEAFS)POTATOLINESBT-O6,ATBT04-06,ATBT04-31，ATBT04-36ANDSPBT02-05;(NEWLEAFSPLUS)POTATOLINESPBMT21-129,PBMT21-350ANDPBMT22-82;(NEWLEAFSY)PO

3、TATOLINESRBMT15-101,SEMT15-02ANDSEMT15-15等品种的转基因马铃薯块茎、植株、生薯条，生薯片、淀粉的检测。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T6682分析实验室用水规格和实验方法SN/T1193基因检验实验室技术要求SN/T1194植物及其

4、产品转基因成分检测抽样和制样方法SN/T1204植物及其加工产品转基因成分实时荧光PCR定性检验方法术语、定义和缩略语下列术语和定义(缩略语)适用于本标准。3.1转基因transgene将物种本身不具有的、来源于其他物种的功能DNA序列，通过各种导人手段，使其在该物种中进行表达，以便该物种获得新的品种特征。3.2聚合酶链式反应polymerisechainreaction,PCR模板基因序列先经高温变性成为单链，在DNA聚合酶作用和适宜的反应条件下，根据模板序列设计的两条引物分别与模板DNA两条链上相应的一段互补

5、序列发生退火而相互结合，接着在DNA聚合酶的作用下以四种脱氧核糖核酸(dNTP)为底物，使引物得以延伸.然后不断重复变性、退火和延伸这一循环，使欲扩增的基因片段以几何倍数扩增。3.3缩略语3.3.1Pata:马铃薯种属特异性DNA引物，扩增的片段为马铃薯块茎贮藏蛋白Patatin基因片段。3.3.2CaMV35S:promoterfromcauliflomermosaicvirus，花椰菜花叶病毒35S启动子。3.3.3NPT-II:neomycinphosphotransferase-I，新霉素-3’一磷酸转移

6、酶.3.3.4NOS:nopalinesynthaseterminator,胭脂碱合成酶3’转录终止子。3.3.5PVYcp:potatoYviruscoatprotein，马铃薯Y病毒外壳蛋白。3.3.6cry3A:一个由B.thuringiensissubsp,Tenebrionis(B.t.t.)strainBI256-82的蛋白。这个蛋白具有抗虫活性，尤其是可以选择性的杀死科罗拉多马铃薯甲虫(Coloradopotatobeetlelarvae),1SN/T1198-20033.3.7CP4EPSPS:5

7、-enolpyrulshikimate-3-phosphatesynthase5-enolpyrulshikimate-3-phosphatesynthase，来源于农杆菌Agrobacteriumsp.StrainCP4的5-莽草酸一3-磷酸合成酶.3.3.8PLRVrep:potatoleafrollvirus，马铃薯卷叶病毒重复序列.3.3.9E93':the3'non-translatedregionofthepearibulose-1,5-bisphosphatecarboxylasesmallsubu

8、nit(rbcS)E9gene.，来源于豌豆的核酮糖-1,5一二磷酸狡化酶E9基因小亚基3'端序列。3.3.10ArabSSUlA:arabidopsisthalianaribulose-1’5-bisphosphatecarboxylase(Rubisco)smallsubunitats1Apromoter,arabidopsisthaliana的核酮搪-1,5一二磷酸