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1、猪链球菌2型西藏小型猪感染模型的初步建立动物医学进展,2Olll,32(4):15—18ProgressinVeterinaryMedicine猪链球菌2型西藏小型猪感染模型的初步建立.周玉岩,李春玲.v,余炜烈,王贵平(1.佛山市海纳川药业有限公司,广东佛山528515;2.广东省农科院兽医研究所,广东广州510640;3.广东省畜禽疫病防治研究重点实验室,广东广州510640)摘要:选取3个流行病学背景不同的猪链球菌2型菌株人工感染西藏小型猪,探讨西藏小型猪作为猪链球茵2型毒力评价模型动物的可行
2、性.12头西藏小型猪分成4个组,A组为阴性对照组接种肉汤培养基;B,C,D三组分别接种猪链球菌2型分离株GZ06—122B,SH06-21D和HA9801.GZ06-122B株和SH06-21D株分离自华南地区健康猪的扁桃体,毒力基因表型分别为sly一/mrp一/el一和sly/mrp/el.HA9801株分离自江苏患败血症死亡的猪体内,毒力基因表型为sly+/mrp+/el-4-.接种GZ06-122B株的试验猪无明显的临床症状,体温不升高,血液循环中也无细菌出现;试验猪感染SHO6—21D株和H
3、A9801株后临床症状相当严重,尤其是感染HA9801株后,出现体温升高,跛行和神经症状,甚至死亡.攻毒后l周内,C组试验猪病死l头,D组病死2头.从而表明HA9801株有很强的毒力,SH06-2lD株次之,GZ06-122B株的毒力较弱,证实了西藏小型猪对猪链球菌2型易感,且可用于区分不同猪链球茵2型分离株的毒力强弱.关键词:猪链球菌2型;西藏小型猪;动物模型中图分类号:S852.611文献标识码:A文章编号:1007—5038(2011)04—0015—04猪链球菌2型(Streptococcu
4、ssuistype2,SS2)不仅可以引起猪脑膜炎,关节炎,心内膜炎,败血症,肺炎和突然死亡,而且可感染人,是一种重要的人兽共患病病原,世界范围内广泛存在[1.3].该菌致病特性复杂,还有健康猪隐性带菌等原因,给防控该病带来了困难.目前尚未有一种有效的疫苗来预防该病的侵袭[4_5].缺乏理想的动物模型是阻碍SS2疫苗研究的重要原因之一.许多动物已被用于SS2的动物致病力试验,但均不理想.常用的实验动物小鼠,家兔和豚鼠虽有作为SS2感染的动物模型,但可重复性差,且其试验结果与本动物发病试验无可比性[6
5、.1o].用普通仔猪进行研究,发病不规律,又难以排除隐性带菌[8],采用猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)弱毒与猪链球菌2型协同感染可复制出猪链球菌病,但难以判断猪链球菌的真正毒力[5].通过肌肉注射SS2四川分离株ZY05719感染SPF巴马小型猪,其临床症状和病理变化等表现与自然感染情况下表现一致[1...本试验选取青藏高原的特有品种——西藏小型猪(Tibetmini—pig)作为模型动物,探讨其对SS2的易感性,用于区分不同SS2菌株的毒力,为研究SS2致病机理,疫苗筛选等奠定基础.1材料与
6、方法1.1材料1.1.1菌株HA9801株,1998年分离自中国江苏患败血症死亡的猪体内,毒力基因表型为sly/mrP/el.SH06-21D株和GZ06-122B株,2006年从华南地区屠宰猪扁桃体中分离,毒力基因表型分另Ⅱ为sly/mrpef和sly一/mrp一/ef一.1.1.2实验动物7周龄健康的西藏小型猪,购自南方医科大学实验动物中心.1.2方法1.2.1菌株的培养菌株先接种普通血平板,37℃培养24h后,挑取单菌落接种含50mL/L犊牛血清的THB培养基中,37℃培养18h.各菌平板法计
7、数后,调整菌液浓度至l×1O.cfu/mL.1.2.2SS2对西藏小型猪的致病性试验1.2.2.1动物分组与接种将12头7周龄健康的西藏小型猪随机分为A,B,C,D共4组,每组3头,在攻毒的前1周分别饲养在4个独立的猪圈中.试验前用灭菌拭子采集鼻腔,扁桃体样本检测SS2均为阴性.在同等条件下,A组3头猪各接种2mL收稿日期:2OlO一09—21基金项目:2005年粤港关键领域重点突破项目(2005A1O9O5Oo6);2008年公益性行业科研专项(200803016)作者简介:周玉岩(197O一),
8、男.湖北恩施人,博士研究生,主要从事基础兽医学研究.*通讯作者16动物医学进展2011年第32卷第4期(总第214期)THB培养基作为阴性对照.B,C,D3组分别静脉接种SS2SH06-21D株,GZ06—122B株和HA9801株的菌液2mL.1.2.2.2临床表现和病理变化观察接种细菌后,每天观察猪的临床表现如体温变化,跛行和神经症状等.每天记录各试验猪的直肠温度.在攻毒后的l,2,3,7,14d采集各试验猪的静脉血,用THB培养基稀释后涂于血平板上,检测血液中细
