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1、批量筛检献血者不规则抗体方法【关键词】献血者;不规则抗体;批量筛检作者单位:454150河南省焦作市中心血站现代输血技术的核心理念是安全和有效输血。近年来,由于血液传染性指标的检测技术不断进步,经输血传染病毒的危险性已大幅度降低。但是,由于人类血型抗原系统的复杂性,由输血引起的输血免疫反应时有发生[1]。保证患者输注免疫学“相容”的血液,预防输血不良反应,已成为广大输血工作者的重要研究课题。我国专家多年前就已经提出,输血前应对受血者和供血者的红细胞不规则抗体进行筛选[2],以提高临床输血的安全性和有效性。但常规的试管法由于费时繁琐
2、,不可能对大量献血者的不规则抗体进行批量筛检。为此,笔者将96孔U型微板看作是96个“短”试管的联合体,将间接抗人球蛋白试验改良后在微板中进行,使献血者不规则抗体的批量筛检简单易行,和试管法对比效果良好,现报告如下。1材料和方法1.1试剂抗人球蛋白试剂(IgG)、抗-D(IgG)、筛选细胞、谱细胞由上海血液生物医药有限责任公司提供;抗-C、抗-c、抗-E、抗-e、抗-Fya、抗-JKa由加拿大DominionBiologicals6Limited公司提供;所有试剂均在有效期内使用。指示细胞由笔者在使用当天配制。1.2仪器设备AT全
3、自动样本处理系统(瑞士HAMILTON公司);Labofuge400平板离心机(美国Beckman公司);HH.W21.600型电热恒温水浴箱(北京光明医疗仪器厂);HTⅢ扫描酶标仪(奥地利ANTHOS公司);KA-2200血球洗涤离心机(日本KUBOTA公司);TG-328A光学分析天平(湘仪天平仪器厂);96孔硬质U形微型板(丹麦Nunc公司)。1.3检测样品1.3.119份已知不规则抗体为阳性的献血者和受血者血清(由日常工作中用试管法筛查并已用谱细胞确定了抗体特异性),用该法重新进行抗体筛查。1.3.27份标准抗血清:将抗-
4、D(IgG)、抗-C、抗-c、抗-E、抗-e、抗-Fya、抗-JKa分别倍比稀释后,和试管法平行测定其效价。1.3.3分批次随机抽取本站无偿献血者标本2160份(2009年1月～2009年6月,每周三次,每次30份),和试管法平行筛查其不规则抗体,阳性结果用谱细胞确定抗体的特异性。1.4醛化、包被筛选红细胞1.4.1将筛选红细胞用生理盐水洗涤3次,再用pH7.2的磷酸盐缓冲液洗涤1次,用含3.4%葡萄糖的磷酸盐缓冲液配制成1%的红细胞悬液。61.4.2用0.05%的戊二醛处理微板,每孔加入100μl,静置20min,弃去,生理盐水
5、洗涤1次。1.4.3将1%筛选红细胞加入微孔板中,每孔50μl,300g离心2min,使红细胞平铺孔底,静置20min。1.4.4用生理盐水洗涤3遍,每次均轻轻拍干备用。1.5抗人球蛋白试剂的稀释用微板法对比试验,确定抗人球蛋白试剂的最佳稀释度为1�∶�3。1.6指示细胞的配制:将3人份O型红细胞混合,用生理盐水洗涤3次,取适量压积红细胞等量加入IgG抗-D血清,37℃孵育30min,离心去上清,用生理盐水洗涤5次,再用pH7.2的磷酸盐缓冲液洗涤1次,用含3.4%葡萄糖的磷酸盐缓冲液配制成1%的红细胞悬液备用。1.7检测1.7.
6、1用AT全自动样本处理系统将检测样品加入醛化、包被好筛选红细胞的微板中,每孔100μl,同时做阳性、阴性对照各2孔,阳性对照加入与筛选细胞含有对应抗体的血清100μl,阴性对照加入AB型血浆100μl,37℃孵育30min。1.7.2弃去孔内液体,用生理盐水洗涤5遍,每次均轻轻拍干。1.7.3加入稀释好的抗人球蛋白试剂,每孔50μl。1.7.4加入稀释好的指示细胞,每孔50μl。61.7.51200g离心2min,孔内红细胞呈扣状沉淀为阴性,平铺于孔底为阳性。1.7.6用酶标仪判读结果根据孔内指示细胞分布情况,用酶标仪判断结果。2
7、结果2.119份抗体阳性标本阳性检出率100%,未出现假阴性。2.27种抗血清效价比较,相差不超过1个滴度,见表1。2.32160份献血者标本,试管法检出5份,阳性检出率0.23%,微板法检出7份,阳性检出率0.32%,经谱细胞确认,具有临床意义的特异性抗体均为5份,分别为1份抗-D、2份抗-E、1份抗-M、1份抗-c,说明微板法有一定的假阳性。表1微板法和试管法检测7种抗血清效价比较DCcEeFyaJKa微板法6432166446432试管法6432864464643讨论6随着输血事业的不断发展,聚凝胺、凝胶试验、酶法等新的不规
8、则抗体检测方法被广泛应用。但确定不完全抗体的最可靠方法仍然是抗人球蛋白法[3]。在本报告中,笔者使用的微板法原理仍是抗人球蛋白试验,改良的核心是将筛选红细胞(抗原)固定在微板的底部,加入血清(抗体)孵育反应后,洗涤时不需要离心,包被的筛选红细胞也脱
