四环素生产菌诱变育种与发酵性能的研究

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1、四环素生产菌诱变育种与发酵性能的研究中国抗生素杂志2000年第2期第25卷论著作者：王敏　路福平　王建玲　杜连祥单位：天津轻工业学院食品工程系，　天津300222关键词：四环素；诱变育种；金色链霉菌　　摘　要　采用紫外线对四环素生产菌金色链霉菌4-28的原生质体进行诱变处理，选育得到一株高产突变株H32-37。该菌在形态上与出发菌株存在明显差异：菌落小，呈圆形或梅花形，表面粗糙，孢子丰富，孢子颜色深，四环素生产能力比出发菌株提高23.9%。研究了其发酵性能，优化了培养基组成和发酵工艺条件，使四环素效价提高了44.4%。Studyonthebreedingofhightetracycline

2、producingstrains　　andtheirfermentationcharacteristicsWangMin，　LuFuping，　WangJianling　and　DuLianxiang　　(DepartmentofFoodEngineering,TianjinInstituteofLightIndustry，　Tianjin300222)　　ABSTRACT　ProtoplastoftheStreptomycesaureofaciens4-28strainwasmutatedbyUV,ahigh-yieldingstrainH32-37wasobtained.Theappa

3、rentdifferencesinmorphologybetweenthestrainH32-37andtheparentstrainwereasfollows:thecolonyissmaller,round-shapeorplumblossom-shape,roughsurface,sporesoutputplentiful,deepgray.Itstetracyclineproductionis23.9%higherthanthatoftheparent.Thefermentationcharacteristicswereinvestigated,themediumandfermen

4、tationconditionwereoptimized.Undertheoptimumcondition,thetetracyclineactivityincreasedby44.4%incomparisonwiththatoftheparentone.　　KEYWORDS　Tetracycline；　Mutationbreeding；　Streptomycesaureofaciens　　四环素具有抗菌谱宽、急性毒性较低、副作用较小的优点，此外通过化学改造可制备有临床价值且疗效更为优越的半合成四环素，保证了它在抗感染药物领域中的重要地位。近年来，四环素在非感染性疾病中的临床应用也得以不断

5、发展。例如它对癌性胸腔积液、肝性胸水、恶性心包积液等疾病均有良好的治疗效果［1，2］。金色链霉菌自20世纪50年代就开始做为四环素的生产用菌，为提高产量，以前多采用对其孢子进行诱变的方法。近年有不少运用原生质体形成和再生来提高抗生素产量的成功报道［3，4］。本文利用紫外线对金色链霉菌的原生质体进行诱变处理，选育得到优于原生产菌株的高产菌株H32-37，并对其发酵特性及发酵工艺进行了研究。　　1　材料与方法　　1.1　出发菌株　　金色链霉菌(Streptomycesaureofaciens)4-28，本院应用微生物研究室提供。　　1.2　培养基　　(1)斜面培养基(%)：麸皮3.6，琼脂2.

6、4，pH自然。　　(2)平板分离培养基(%)：面粉2，蛋白胨0.1，KH2PO40.05，琼脂2，pH自然。　　(3)种子培养基(%)：黄豆饼粉2，淀粉4，蛋白胨0.5，酵母粉0.5%，CaCO30.4，(NH4)2SO40.3，NaBr0.2，MgSO40.025，KH2PO40.02，pH自然。　　(4)发酵培养基(%)：黄豆饼粉4，淀粉10，酵母粉0.25，蛋白胨1.5，(NH4)2SO40.3，CaCO30.5，NaBr0.2，MgSO40.025，2-巯基苯丙噻唑0.0025，pH自然。　　(5)再生培养基［5］。　　(6)S培养基［5］。　　(7)P稳定液［5］。　　1.3　培

7、养条件　　将菌种接于斜面培养基，35℃培养4～5d，孢子成熟后，配制成浓度为107个/ml的孢子悬浮液。取1ml接种于种子培养基，31℃振荡(180r/min)培养16～18h。按8%接种量将种子培养液接入发酵培养基中，于31℃振荡(260r/min)培养6d。取样，测定四环素效价。　　1.4　原生质体的制备　　取1ml孢子悬浮液接种于S培养基中，28℃振荡(180r/min)培养9h，按2%接种量转接于含有1%甘氨酸的