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1、一种不依赖于无菌培养的拟南芥活体转基因种子筛选方法浙江大学(农业与生命科学版)35(4):372～376,2009JournalofZhejiangUniversity(Agric.&LifeSci.)文章编号:1008—9209(2009)04—0372—05DOI:10.3785/j.issn.1008—9209.2009.04.003一种不依赖于无菌培养的拟南芥活体转基因种子筛选方法张好富,张宪银(浙江大学农业与生物技术学院农学系,浙江杭州310029)摘要:拟南芥活体转基因种子的筛选仍主要采用无菌培
2、养技术,存在操作麻烦,容易污染而造成转基因材料损失等问题.本研究在传统组织培养筛选技术的基础上,通过去除原培养基成分中对种子发芽和筛选不必需的蔗糖和有机成分,降低大量元素的浓度,缩短筛选时间,从而免除了传统转基因种子筛选中培养基和种子消毒的繁琐步骤,建立了一种不依赖于无菌培养的转基因种子筛选方法.与无菌培养筛选比较,筛选效果相同,但简化了试验步骤,提高了筛选操作的可靠性.关键词:拟南芥;活体转基因;筛选;潮霉素抗性中图分类号:Q812文献标识码:AZHANGHao—fu,ZHANGXian-yin(Departme
3、ntofAgronomy.CollegeofAgriculture&Biotechnotogy.ZhejiangUniversityHangzhou310029.ChinaAsepticculturefreemethodforscreeningArabidopsistransgenicseedsfrominplantatransformation.JournalofZhejiangUniversity(Agric.&LifeSci.),2009,35(4):372—376Abstract:Steri
4、lecultureisnormallyemployedinscreeninginplantatransformedseeds,whichisbothlabor-intensiveandcontamination—prone,andmateriallosseventsoftenoccurbecauseoffailureinsterilization.AnasepticculturefreemethodwasdevelopedforscreeningArabidopsistransgenicseedsfrominpla
5、ntatransformationbasedonthetraditionalmethodbydepletingsucroseandorganiccomponentsunnecessaryforseedgerminationandscreening,reducingmacronutrientsandshorteningthescreeningtime.Themethodinheritsalltheadvantagesofthetraditiona1method,butissimplerandmorereliablei
6、noperation.Keywords:Arabidopsis;inplantatransformation;screening;hygromycinresistance活体(inplanta)转化,又叫原位转化,整体转化,免除了传统转化技术对组织培养的依赖,使拟南芥的转化过程大大简化,同时也避免了组织培养过程中出现的体细胞突变问题,成为拟南芥转基因功能验证,T—DNA插入突变体库构建,基因打靶等重要研究领域的首选转基因技术D-z].活体转化的频率大多在1以下,为了获得一定数量的转化体需要筛选大量的转基因种子.目前
7、采用的活体转基因技术中,转基因种子的筛选步骤仍然依赖无菌培养技术,存在操作麻烦,容易污染而造成实验材料的损失等问题.所以开发一种简单有效的不依赖无菌收稿日期:2008—05—09基金项目:国家自然科学基金资助项目(30571l46).作者简介:张好富(1983一),男,山东潍坊人,硕士研究生,从事植物转基因方面的研究.Tel:0571-86971705;E—mailhfzhang83@163.com通讯作者:张宪银,男,副教授,从事植物生物技术研究.Tel:0571—86971705;E—mail:xyzhang@
8、zju.edu.cn.第4期张好富,张宪银:一种不依赖于无菌培养的拟南芥活体转基因种子筛选方法373培养技术的筛选方法早就受到重视.目前比较成功的方法是在土中生长的幼苗上喷施筛选剂.如Xiang等[3]早在1999年就用含19/6TritonX一100的卡那霉素水溶液喷施土中生长的2片真叶期的幼苗,可以筛选出抗性植株.Galbiati等[4]在构建大规模T-
