碱性磷酸酶染色液(偶氮偶联法)

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1、北京雷根生物技术有限公司www.leagene.com碱性磷酸酶染色液(偶氮偶联法)简介：碱性磷酸酶(Alkalinephosphatase，简称ALP或AKP)为一类磷酸酯酶，广泛分布于哺乳动物组织内，碱性磷酸酶染色液(偶氮偶联法)不是采用金属沉淀法来显示碱性磷酸酶活性，而是采用偶氮偶联法(又称同时偶联法)，其原理是在pH9.2～9.8的碱性条件下，细胞内碱性磷酸酶可使AB-BI磷酸盐水解，释放出磷酸与萘酚，后者与偶联重氮盐生成有色产物，定位于细胞质中。该染液可用于血液、骨髓或细胞涂片、冰冻切片

2、、梯度入水后的石蜡切片等的碱性磷酸酶染色,碱性磷酸酶活性部位呈蓝色。组成：编号名称DE00044×2mlDE00044×10mlDE00044×20mlStorage试剂(A):ALP固定液2ml10ml20mlRT避光试剂(B):ALP孵育液B1:AS-BI染色液1ml5ml10ml-20℃避光B2:FBB染色液1ml5ml10ml-20℃避光临用前，按B1:B2=1:1比例混合，即为ALP孵育液，即配即用。试剂(C):核固红染色液2ml10ml20ml4℃避光试剂(D):甲基绿染色液2ml10

3、ml20mlRT避光使用说明书1份操作步骤(仅供参考)：(一)、涂片或切片1、血液、骨髓或细胞涂片、冰冻切片、石蜡切片入ALP固定液固定，水洗。2、滴加配制好的ALP孵育液，放入湿盒中，避光孵育，水洗。3、入核固红染色液或甲基绿染色液复染。4、水洗、镜检或甘油明胶封固后镜检。(二)贴壁培养细胞1、取6孔板或其他容器培养的细胞，弃液，PBS清洗干净。2、加入ALP固定液固定或4%多聚甲醛固定，PBS清洗。3、滴加配制好的ALP孵育液，放入湿盒中，避光孵育，PBS清洗。4、入核固红染色液或甲基绿染色液

4、复染。5、PBS清洗、镜检。染色结果：北京雷根生物技术有限公司www.leagene.comALP活性部位蓝色细胞核红色(核固红)或绿色(甲基绿)血液、骨髓涂片结果判断：一般以积分报告结果，根据100个中性粒细胞阳性颗粒进行0～4+计分。细胞分值染色特点0无颗粒1稍有颗粒2中等程度颗粒3多数颗粒4充满颗粒临床意义：1、类白血病反应积分明显增高，未经治疗的慢性粒细胞白血病积分明显减低。2、急性细菌性感染积分明显增高，病毒性感染积分多正常或减低。3、再生障碍性贫血积分常增高，PNH、MDS积分常减低。

5、注意事项：1、血液或骨髓细胞涂片或其他样本均应新鲜，薄厚适宜，及时固定，否则会影响酶的活性。2、培养细胞染色操作过程中，清洗、染色等步骤都应轻微，以免损伤或丢失细胞。3、ALP孵育液易失效或降低阳性强度，即配即用，不宜久置。4、复染时，核固红染色液或甲基绿染色液二者取其一。5、每次染色时，应有阳性对照片。