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1、第二章榄仁叶主要成分测定2.1实验仪器与试剂2.1.1粗蛋白测定，采用考马斯亮蓝法一、仪器（1）分析天平（2）具塞刻度试管10ml×8（3）吸管0.lml×I，lml×Z，5ml×I（4）研钵（5）漏斗（6）离心管10ml（7）容量瓶10ml（8）离心机（9）721型分光光度计二、试剂（1）标准蛋白质溶液称取10mg牛血清白蛋白，溶于蒸馏水并定容至100ml，制成100pg／ml的原液。（2）考马斯亮蓝G－250蛋白试剂称取100mg考马斯亮蓝G－250，溶于50ml90％乙醇中，加入85％（m／v）的磷酸100ml，最后用蒸馏水定容
2、到1000ml。2.1.2粗脂肪的测定，采用索氏抽提法1、索氏提取器2、电热恒温鼓风干燥箱。3、干燥器。4、恒温水浴箱。5、滤纸筒。6、无水乙醚（不含过氧化物）或石油醚（沸程30℃～60℃）2.1.3粗纤维的测定，采用重量法测定一、仪器1、实验室用样品粉碎机或研钵。2、分样筛:孔径0.45mm(40目)。3、分析天平:感量0.0001g。4、电热恒温箱:可控制温度在130℃。5、高温炉:电加热,有高温计且可控制炉温在550-600℃。6、消煮器:有冷凝球的高型烧杯(500ml)或有冷凝管的锥形瓶。7、过滤装置:抽真空装置、吸滤瓶及漏斗
3、。8、滤器:200目不锈钢网或尼龙网,或G2号玻璃滤器。9、古氏坩锅:30ml,预先加入30ml酸洗石棉悬浮液,再抽干,以石棉厚度均匀、不透光为宜。10、干燥器,以氯化钙(干燥试剂)或变色硅胶为干燥剂。二、试剂1、硫酸(GB625-77):分析纯,0.255±0.005N,每100ml含硫酸1.25g,应用氢氧化钠标准溶液标定。2、氢氧化钠(GB629-81):分析纯,0.313±0.005N,每100ml含氢氧化钠1.25g,应用邻苯二甲酸氢钾法标定,不含或微含碳酸钠。3、酸洗石棉:市售或自制(中等长度酸洗石棉在1:3的盐酸
4、中煮沸45min,过滤后于550℃灼烧16h,用0.255N硫酸浸泡且煮沸30min,过滤且用水洗净酸,同样用0.313N氢氧化钠溶液煮沸30min,过滤,用少量硫酸溶液洗一次,再用水洗净,烘干后于550℃灼烧2h,其空白试验结果为每克石棉含粗纤维值小于1mg。4、95%乙醇(GB679-80):化学纯。5、乙醚(HG3-1002-79):化学纯。6、正辛醇：分析纯，防泡剂。2.1.4粗灰分的测定，直接灰化法测定一、仪器15-25ml的石英坩埚高温电炉干燥器分析天平水浴锅或调温鼓风烘箱二、试剂硝酸1:1溶液30%的双氧水100g
5、/L硝酸铵溶液：称硝酸铵10.0g溶于100ml水中、2.2实验步骤2.2.1粗蛋白测定，采用考马斯亮蓝法1．标准曲线的制作取6支具塞试管，编号后，按下表加入试剂。操作项目管号123456标准蛋白质溶液(ml)00.20.40.60.81.0蒸馏水(ml)1.00.80.60.40.20G-250试剂(ml)各5蛋白质含量（μg）020406080100盖上塞子，摇匀。放置2min后在595nm波长下比色测定（比色应在lh内完成）。以牛血清白蛋白含量（μg）为横坐标，以吸光度为纵坐标，绘出标准曲线。2．样品中蛋白质含量的测定（1）称取
6、1g的榄仁树叶，取叶片加5倍体积PH8.0的100mmol/L磷酸缓冲液于研钵中将叶片研磨至浆状。四层纱布过滤。将滤液在4度下离心3分钟，取上清液即得叶片粗蛋白。（2）另取1支具塞试管，准确加入0.lml样品提取液，再加入0.9ml蒸馏水，5ml考马斯亮蓝G－250试剂，充分混合，放置2min后，以标准曲线1号试管做参比，在595nm波长下比色，记录吸光度。3.结果处理根据所测样品提取液的吸光度，在标准曲线上查得相应的蛋白质含量（μg），按下式计算：样品蛋白质含量（μg／g鲜重）＝（查得的蛋白质含量（μg）×提取液总体积（ml））／（
7、样品鲜重（g）×测定时取用提取液的体积（ml））4.注意事项（1）如果测定要求很严格，可以在试剂加入后的5-20min内测定光吸收，因为这段时间内颜色最稳定。（2）测定中，蛋白-染料复合物会有少部分吸附于比色杯壁上，但此复合物的吸附量可以忽略。测定完后可用乙醇将蓝色的比色杯洗干净。2.2.2粗脂肪的测定，采用索氏抽提法
