细胞周期检测试剂盒说明书

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1、南京建成生物工程研究所仅用于科研、实验室细胞周期检测试剂盒说明书（细胞DNA含量检测试剂盒）一、产品简介细胞周期（cellcycle）是指连续分裂细胞从一次有丝分裂结束到下一次有丝分裂结束所经历的整个过程。在这个过程中，细胞遗传物质复制并加倍，且在分裂结束时平均分配到两个子细胞中去。细胞周期又可以分为间期（interphase）和有丝分裂期(Mphase)，细胞间期又常划分为休眠期（G0），DNA合成前期（G1），DNA合成期（S），DNA合成后期（G2），整个周期可表示为G1→S→G2→M。DNA周期检测可用来反应细胞周

2、期的各个期的状况，即细胞增殖状况。利用细胞内DNA能够和荧光染料（如碘化丙啶—PI）结合的特性，细胞各个时期其DNA含量不同从而结合的荧光染料不同，流式细胞仪检测的荧光强度也不一样。细胞发生凋亡时，由于胞浆和染色质浓缩、核裂解，产生凋亡小体，使细胞的光散射性质0发生变化。在细胞凋亡的早期，细胞对前向角光散射的能力显著降低，对90角光散射的能力0增加或没有变化。在细胞凋亡的晚期，前向角和90角光散射的信号均降低。因此可通过流式细胞仪测定细胞光散射的变化观察凋亡细胞。用PI对细胞进行染色，凋亡细胞由于总DNA量降低，于正常G0

3、/G1细胞群前出现一DNA低染细胞群，即G1峰前出现亚二倍体峰（sub-G1），细胞凋亡群。本试剂盒可应用于培养细胞（悬浮、贴壁）的DNA含量（细胞周期）检测。二、试剂盒组份组份50assays100assays储存条件RNaseA溶液5.0mL10.0mL-20℃碘化丙啶（PI）20.0mL40.0mL4℃避光三、试剂盒以外自备仪器和试剂低温高速离心机、微量移液器、1.5mL离心管、流式细胞仪、PBS、-20℃无水乙醇四、保存条件：-20℃保存，碘化丙啶（PI）4℃，需避光保存。有效期一年。南京建成生物工程研究所仅用于科

4、研、实验室五、注意事项：1、碘化丙啶（PI）4℃，需避光保存。2、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。六、操作规程1、准备工作：a、无水乙醇放置-20℃冰箱过夜。b、RNaseA溶液溶解后混匀并置于冰浴上备用。2、样品的处理a、对于悬浮细胞5按照常规的方法离心（2000rpm，5min）收集细胞5×10，小心吸除上清，同时确保尽量没有细胞被吸除，PBS洗涤一次，同前吸尽上清后。加入0.3mlPBS重新悬浮细胞，下转第3步进行实验。b、对于贴壁细胞5按常规的方法用胰酶消化贴壁细胞，并收集细胞5×10。用PBS洗

5、涤一次，吸尽上清后。加入0.3mlPBS重新悬浮细胞，下转第3步进行实验。3、把第2步制备好的单细胞悬液全部缓慢转移至1.2ml-20℃无水乙醇中，并涡旋激烈震荡后放置-20℃冰箱中1h，或过夜。4、离心（2000rpm，5min），吸尽上清后，加入1.0mlPBS重新悬浮细胞，室温放置15min。5、离心（2000rpm，5min），吸尽上清后，加100μLRNaseA并充分悬浮细胞，然后于37℃水浴30min；6、再加入400μLPI并充分混匀，4℃避光30min；7、上机检测，记录激发波长488nm处红色荧光。南京建

6、成生物工程研究所地址：南京市中央路258－27号电话：（025）83360321新立基大厦11层1106室8336096983113890邮编：21000983112287(财务)83360272(技术电话)联系人：季建平传真：（025）8322794383609960投诉电话：（025）57713719/13813881385短信：13815858329建成主页：www.njjcbio.com（建成生物）E-maiL:njjcbio@vip.163.com