舒肝健脾补肾方对慢性应激肝郁模型妊娠大鼠、胎鼠宫内发育的干预作用论文

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1、舒肝健脾补肾方对慢性应激肝郁模型妊娠大鼠、胎鼠宫内发育的干预作用论文朱姝，王希浩，张爱华，黄保民【摘要】目的研究舒肝健脾补肾中药对慢性应激肝郁模型孕鼠血清P、IGF-1、IGF-2、子宫蜕膜PR水平及胎鼠、胎盘重量的影响，探讨肝郁影响生殖功能的机理及舒肝健脾补肾中药的作用机理。方法复制孕鼠慢性应激肝郁模型，将60只孕鼠随机分为5组：正常组、模型组、舒肝健脾补肾高组、舒肝健脾补肾低组、滋肾育胎丸组。孕19d剖宫取胎，放射免疫法测定孕鼠血清P、IGF-1、IGF-2的含量，用免疫组化法检测子宫蜕膜PR水平。结果模型组孕鼠血清P、IGF-1、I

2、GF-2、子宫蜕膜PR水平及胎鼠、胎盘重量较正常组明显降低(P﹤0.01)。舒肝健脾补肾高组血清P、IGF-1、IGF-2、子宫蜕膜PR水平及胎鼠、胎盘重量明显高于模型组(P﹤0.01)。舒肝健脾补肾低组与与模型组相比无明显差异(P﹥0.05)。结论舒肝健脾补肾方能提高慢性应激肝郁模型胎鼠、胎盘的重量。能提高孕鼠血清IGF-1、IGF-2的水平、P水平、子宫蜕膜PR水平。研究结果为临床运用舒肝健脾补肾法治疗肝郁型胎儿宫内发育迟缓提供了理论依据。【关键词】肝郁模型;舒肝健脾补肾方;胎儿宫内发育迟缓胎儿宫内发育迟缓是指胎儿出生体重低于同孕龄胎

3、儿平均体重的两个标准差或第10百分位数.freell，由河南省中医药研究院制剂室提供。批号：20070810。1.3试剂及器材P、IGF-1放免试剂盒(购自天津九鼎医学生物工程有限公司)。IGF-2放免试剂盒(购自解放军总医院科技开发中心放免研究所提供)。敞箱(自制)：高为50cm，长宽均为80cm,周壁为黑色，底面用白线划分为面积相等的25块。束缚筒(自制)：束缚筒直径为6cm，长为16cm。制动箱(自制)：长为40cm，宽为30cm，高为30cm。程控穿梭箱：DCS-2，医科院药研所制。电子秤：EB-2800M，LIBROR。离心沉淀

4、机：LXJ-II，上海医用分析仪器厂。石蜡切片机：Leit2，德国。摊片烤片机：HG3003-3，南京电器三厂制造。微波炉：格兰仕，800B。双目显微镜(自动照相)：BHA，日本。全自动γ-放射免疫计数器：FJ-20089，南京。2方法2.1动物模型的建立按文献法2～5，对模型组及药物干预组孕鼠进行慢性心理应激实验。孕鼠接受的应激包括：(1)束缚筒束缚，2h/次，3次/d。(2)程控穿梭箱声-电刺激，刺激参数为①声：强度为65dB，每循环持续60s，3循环/次，9循环/d;②电：足底电击电流强度为3mA，每循环持续65s，3循环/次，9循

5、环/d。连续刺激至动物处死，应激实验环境与饲养环境分开，正常组孕鼠不给予刺激，孕鼠受刺激后出现尖叫、直立、挠腮、撕咬、蜷缩、饮食减少、大便稀薄、体重下降，提示肝郁模型建立。2.2给药剂量与方法正常组给予蒸馏水灌胃，10ml/kg，1次/d,连续18d。模型组造模后给予蒸馏水灌胃，10ml/kg，1次/d，连续18d。舒肝健脾补肾高剂量组造模后给予舒肝健脾补肾方浸膏稀释液灌胃，13.12g/kg·d，相当于成人剂量的13.4倍，10ml/kg，1次/d，连续18天。舒肝健脾补肾低剂量组造模后给与舒肝健脾补肾方浸膏稀释液灌胃，6.56g/kg

6、·d，相当于成人剂量的6.7倍，10ml/kg，1次/d，连续18d。滋肾育胎丸组：造模后常规饲养,.freell/kg，1次/d，连续18d。2.3检测指标及方法2.3.1一般状态及自主活动的观察分组后，开始仔细观察和记录各组孕鼠体重及自主活动情况，并作出造模前后孕鼠的体重及自主活动情况变化对比。在心理应激刺激前后，分别进行开放场地实验(敞箱试验，Open-fieldtest，OFT):将受试大鼠放在OFT中心区域，同时开始记录3min内孕鼠穿越格数(以三足踏入同一格为准)，以及孕鼠直立(双前肢离地)次数6～8。每只动物仅进行1次测定，

7、3min/次。2.3.2阴道上皮脱落细胞的观察大鼠合笼后，每天早上8点进行阴道上皮脱落细胞的观察。将沾有生理盐水的棉签轻柔旋人母鼠的阴道(0.5cm)，旋转一圈以后拿出,再将棉签上沾有的阴道内分泌物涂于清洁的玻片上。稍干，用95%水乙醇固定3～5min，HE染色，风干。在200×普通光学显微镜下观察，1次/d，直到见到大量云片状上皮细胞中夹有大量精子作为妊娠第1天。2.3.3血清的测定在妊娠第19天时断头处死孕鼠,取血4～5ml，静置分层、离心、分离血清，将分离血清储存于-70℃冰箱内。用放射免疫分析法测定P、IGF-1、IGF-2，由河

8、南省中医药研究院放免室检测，按试剂盒说明书操作。2.3.4子宫蜕膜PR水平的检测将4%多聚甲醛液固定的子宫，常规脱水，浸蜡、包埋，切片厚度5μm。由河南省肿瘤医院病理实验室检测，严格按照PR免