兔耳风提取物的抑菌作用研究论文

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1、兔耳风提取物的抑菌作用研究论文葛菲张晓伟裴各琴陈武赖学文刘庆华【摘要】目的比较不同极性溶剂提取铁灯兔耳风与杏香兔耳风成分对3种常见微生物的抑菌作用。方法采用水、70%乙醇、95%乙醇及醋酸乙酯等不同极性的溶剂提取；用管碟法测抑菌圈的大小进行抑菌实验，用两倍稀释法进行最小抑菌浓度的测定。结果极性大的溶剂所提取出的成分对细菌（金黄色葡萄球菌）有明显抑菌作用，杏香兔耳风水提取物的最小抑菌浓度为6.25%,铁灯兔耳风水提取物的最小抑菌浓度为3.13%。极性小的溶剂提取出的成分对霉菌（白色念球菌）有抑菌作用。结论不同极性的提取物抑菌作用各不相同。【关键词】兔

2、耳风；提取物；抑菌作用Abstract：ObjectiveToparetheeffectofdifferentpolarityextractingreagentsAinsliaeamacroclinidioidesandA.fragransonthreekindsofmonmicroorganisms.MethodsTheactivesubstanceAinsliaeainedbyadoptingthecupplatemethod.Theminimalinhibitoryconcentration(MIC)ethodintubes.ResultsT

3、heextractsfromstrongpolaritysolventhadobviousinhibitoryeffectonbacteria(Staphylococcusaureus),andtheminimalinhibitoryconcentrationofA.fragransacroclinidioidesacroclinidioidesHayata和杏香兔耳风A.fragransChamp.均采自江西婺源，并经笔者鉴定。2方法2.1铁灯兔耳风提取物的制备2.1.1水提物将铁灯兔耳风剪碎后，用粉碎机适当粉碎，称取200g粉碎后药材置于500

4、0ml烧瓶中，加入蒸馏水，浸泡30min。置电热套中缓缓加热至沸，并保持微沸状态4h，停止加热，趁热过滤，将水提液浓缩为浸膏。2.1.2醇提物称取粉碎铁灯兔耳风药材100g置于烧瓶中，加入95%乙醇，浸泡30min，回流提取2次，第1次2h，第2次1.5h。过滤，合并滤液。回收乙醇，将滤液浓缩至浸膏状。同法可得70%乙醇提取物。2.1.3酯提物称取粉碎铁灯兔耳风药材100g置于1000ml烧瓶中，加入500ml醋酸乙酯，浸泡30min。回流提取2次，第1次2h，第2次1.5h。过滤，合并滤液。回收醋酸乙酯得浸膏。2.1.4样品制的制备样品液的制备将

5、铁灯兔耳风的4种提取物配制成含生药量为50g/100ml的样品液。2.2杏香兔耳风提取物的制备2.2.1水提物称取粉碎杏香兔耳风药材100g置于烧瓶中，加入蒸馏水，其余步骤同铁灯兔耳风水提法。2.2.2醇提物称取粉碎杏香兔耳风药材50g置于烧瓶中，加入95%乙醇，其它操作同铁灯兔耳风乙醇提取物提取法。用70%乙醇提取，其它操作同上，得70%乙醇提取物。2.2.3酯提物称取粉碎杏香兔耳风药材45g置于烧瓶中，其它操作同铁灯兔耳风醋酸乙酯提取物提取法。2.2.4样品液的制备将杏香兔耳风的4种提取物配制成含生药量为50g/100ml的样品液。2.3种菌的

6、准备在超净工作台上将大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌分别接种于各自培养基上，在37℃恒温培养箱中培养48h。制成种菌备用。2.4培养基的准备取30.4g血琼脂培养基于锥形瓶中，加入800ml蒸馏水；取6.6g沙氏培养基及琼脂粉8g于锥形瓶中，加入400ml蒸馏水，与包扎好的培养皿、移液管、牛津杯、试管等一起放入灭菌锅中高压蒸气灭菌20min(103.4kPa)。2.5抑菌活性的测定培养基倒好平板后，冷却至凝固。用接种环挑取上述活化后菌种，涂满整个平板，盖好平皿盖，于培养箱中培养24h，制成含菌平板。然后在平板上等距离分散的轻轻放上4个牛津杯，在

7、杯内分别注入100μl样品液。以上操作均在无菌室内进行。把每个处理过的培养皿放到如下条件培养：细菌37℃，24h；霉菌24℃，48h。测定抑菌圈直径，取其平均值。并以此判断兔耳风不同溶剂提取物对供试菌的抑制效果。2.6最小抑菌浓度(MIC)的测定(两倍稀释法)根据抑菌圈的测定结果，选取金黄色葡萄球菌做最小抑菌浓度(MIC)的测定，选取杏香兔耳风和铁灯兔耳风的水、70%乙醇、95%乙醇提取物做为样品溶液。挑取金黄色葡萄球菌一环接种于肉汤培养基中，放入培养箱培养24h。取1支无菌试管倒入2ml肉汤，接种已培养24h的金黄色葡萄球菌一环，放入培养箱培养6

8、h。取54支试管分为6组，每组9支。在1～6号试管中各加入1ml肉汤，并在1号试管中加入1ml药液，从第2支试管开始依次从