资源描述：
《梯度密度离心法分离肝癌细胞及其转移性细胞株的建立论文》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、梯度密度离心法分离肝癌细胞及其转移性细胞株的建立论文张萌，胡少为，姜桔红，文剑明【摘要】【目的】建立新的肝细胞癌细胞系，为肝癌实验研究提供更多纯化癌细胞。【方法】从肝细胞癌患者原发灶和门脉癌栓中获取癌组织，采用Percoll浓度梯度分离癌细胞进行培养，用微环境消化法获取癌细胞克隆并建立细胞系，对培养成功的细胞系进行生长曲线测定、染色体G带核型分析、对比基因组杂交和裸鼠接种成瘤实验。【结果】对20例肝癌组织进行癌细胞分离培养和克隆.freela(HCC)celllinesandprovidemorep
2、urelivercarcinomacellsforHCCstudies.【Methods】ThecarcinomatissuestheprimarylesionandmetastaticlesioninportalveinofHCC.Thecarcinomacellsicro-environmentaldigestionandcelllinesosomekaryotype,parativegenomichybridization(CGH)oftheestablishedcellsplantedinn
3、udemicefortumorigenesis.【Results】20casesofHCCcells2casesofemboliofportalvein.Thekaryotypeshoosomes).Amarkerchromosomecontaining1qand6p［t(1;6)］arkerchromosomecontainingalonghomogeneouslystainingregion(hsr)inH4Mcells.ThemaingeicalterationsanalyzedbyCGHbe
4、ramplificationof1q,3q,5p,6p,7qand8qandlossof4q,.freelplificationof6p,7p,11p,11q13andlossof8p,9,13q,16qinH4Mcells.ImplantationofH2Mcellsinnudemiceforamonthproducestypicalhumanhepatocellularcarcinoma,butnotumorforH4Mcells.【Conclusions】Percolldensitygradi
5、entcentrifugeandmicro-environmentaldigestionisaneffectivemethodforcloningofprimarycarcinomacellandcelllineestablishment.TodelsforfurtherscreeningofoncogenesandtumorsuppressorgenesinHCC.Keya;HCCcelllines;karyotype;parativegenomichybridization肝细胞癌（hepato
6、cellularcarcinoma,HCC）是常见癌症之一。尽管已有多个肝癌细胞系供实验室研究用，但这些细胞多由国外研究人员建立，而且极少从门脉转移灶建立1。此外，已建立的细胞系缺乏细胞遗传学改变的资料，不能为肝癌癌基因、抑癌基因的筛选及肝癌转移机制研究提供线索。本文描述2例门脉转移性肝癌细胞系的建立过程并检测其分子遗传学改变，旨在为HCC的深入研究提供实验工具。1材料和方法1.1标本来源20例肝癌组织取自中山大学附属第一医院肝胆外科手术标本，每份癌组织均取原发灶和门脉癌栓，经病理检查证实和进行细胞
7、培养。1.2细胞培养原发瘤及门脉癌栓组织用含5倍浓双抗（500u/mL青霉素和500?滋g/mL链霉素）PBS冲洗后剪成约1mm3大小，用0.1%的胶原酶（SigmaChemicalCo.,St.Louis,MO）在37℃下消化30min，用120目不锈钢网过滤。将细胞悬液铺入装有等渗梯度密度PercollTM（AmershamPharmaciaBiotechAB,Uppsala,SL塑料离心管的上层，Percoll浓度梯度从底层至最高层依次为70%、50%、40%，每层5mL。4℃下3500×g离
8、心30min，离心后在40%层内吸取含细胞的Percoll液，用F12培养液稀释5倍，275×g离心10min。沉淀细胞洗涤3次。最后用含20%胎牛血清、10ng/mL表皮生长因子（EGF）、10?滋g/L转铁蛋白、10mmol/L谷氨酰胺、100mg/L丙酮酸钠、100U/mL青霉素和100?滋g/mL链霉素的F12培养液悬浮。将5mL含1×106细胞的培养液接种在25cm2塑料培养瓶（Corning,USA），置37℃、饱和湿度的5%CO2孵箱培养。1.3癌细胞克
