金线莲主要成分kinsenoside的体外抗癌活性研究论文

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1、金线莲主要成分kinsenoside的体外抗癌活性研究论文蔡金艳张锦文，唐菲，张小琼，徐江涛，张勇慧【摘要】目的对金线莲Anoectochilusroxburghii(TT分析法。结果对3种敏感细胞株：人白血病细胞株(HL-60)、人肺癌细胞株(A-549)、人肝癌细胞株(BEL-7402)筛选结果10-5mmol/L的化合物kinsenoside时抑制率均小于85%，评定为无效。结论化合物kinsenoside的抗癌活性不显著。【关键词】金线莲;kinsenoside;抗癌Abstract：ObjectiveToinvestigatetheinvitroantitumoref

2、fectofkinsenoside,thehighyieldingconstituentfromAnoectochilusroxburghii(ethodsSRBassayandMTTcolorimetricassayployed.ResultsTheexperimentaldataoftheinhibitingeffectofkinsenosideat10-5mmol/Lonthreekindsofhumanleukemiacells(HL-60),humanlungcancercells(A-549)、humanhepaticcarcinomacell(BEL-7402)r

3、espectivelyresultedinarationomorethan85%,ethyl4-β-D-glucopyranosyl-butanoate(Ⅱ)5，并发现kinsenoside含量很高。Kinsenoside作为开唇兰属多种植物含有的主要成分，其降血糖6、保肝护肝7、降血脂8等活性已多有研究。本实验选取3种敏感的肿瘤细胞株，对该化合物进行抗肿瘤活性测试。1材料与试剂1.1肿瘤细胞株和培养基人白血病细胞株HL-60、人肺癌细胞株A-549、人肝癌细胞株BEL-7402(中国科学院细胞库)培养在含10%胎牛血清(杭州四季青生物工程材料有限公司)的RPMI1640培养基

4、(Gibco公司)中，培养条件为：37℃，饱和湿度，5%CO2的培养环境。1.2试剂3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazoliumbromide(MTT)(Sigma公司)溶解在过滤除菌的1×PBS(pH值7.4，NaCl0.8%，KCl0.02%，Na2HPO40.144%，KH2PO40.024%)，终浓度0.5mg/ml;SRB(美国Sigma公司)溶解在1%的乙酸，终浓度4mg/ml;SDS(北京鼎国生物技术发展有限公司)溶解在10mmol/L的盐酸中，终浓度为10%;注射用盐酸阿霉素(Adriamycin,AD

5、M)购自浙江海正药业股份有限公司。受试药kinsenoside纯度经鉴定在98%以上;金线莲药材由福建省漳州市南靖县和溪镇供销社提供，由中国科学院武汉植物研究所王映明教授鉴定。2方法2.1MTT比色法体外抗肿瘤药物筛选取处于指数增长期细胞种在96孔板里(细胞浓度为20000个/ml，100μl/孔)，培养24h使细胞贴壁，去除上清，加200μl/孔带药新鲜培养基：化合物事先溶解在DMSO或者生理盐水里，当测试时用完全培养基稀释成所需浓度，注意DMSO终浓度不能超过0.1%。每个浓度设6个复孔，并设空白对照孔(只加培养基)和阴性对照,同样设6个复孔。培养实验要求时间，去除上清，加

6、100μl/孔浓度0.5mg/ml的MTT。培养4h后再补加100μl/孔的10%的SDS。37℃下10h后取出，微震荡5min，放置室温下30min，在A570nm波长下测OD值,并计算抑制率。抑制率(%)=对照组OD值-测试组OD值对照组OD值×100%2.2SRB法体外抗肿瘤药物筛选取处于指数增长期细胞种在96孔板里(细胞浓度为20000个/ml，100μl/孔)，培养24h使细胞贴壁，去除上清，加200μl/孔带药新鲜培养基：化合物事先溶解在DMSO或者生理盐水里，当测试时用完全培养基稀释成所需浓度，注意DMSO终浓度不能超过0.1%。每个浓度设6个复孔，并设空白对照孔

7、(只加培养基)和阴性对照，同样设6个复孔。继续培养至试验设计时间，终止培养，去除上清，每孔加10%TCA200μl，4℃条件固定lh。用二次蒸馏水冲洗5遍，自然晾干后每孔加入4mg/mlSRB溶液，室温下染色15min，弃上清，用1%乙酸冲洗5遍以去除非特异性结合的染料。每孔加入100μl10mmol/LTris溶液，在A515nm波长下测OD值，并计算抑制率(计算方法同MTT比色法)。3结果见表1~2。表1阳性对照药品VP-16对肿瘤细胞的抑制作用表2kinsenoside的抗肿瘤活性筛选