外界条件的改变对红花离体培养的影响论文

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1、外界条件的改变对红花离体培养的影响论文杨晶，李天航熊立东，付宏歧李校堃【摘要】目的研究外界培养条件的变化对红花离体培养过程中不同发育阶段培养物的影响。方法以红花种子诱导的无菌苗子叶为外植体，分别接种至含有不同碳氮源、不同PH值、不同温度、不同湿度和不同光照的培养基中，观察其生长情况。结果通过实验筛选出蔗糖浓度为3%，KNO3浓度为MS培养基中KNO3浓度的2倍，最佳pH为6.2，红花离体培养体系在24℃.freelentstagesofcultureinvitro.MethodsThesaffloediump

2、eratures,humidityandlightanditsgroesMSmediumKNO3concentrationtheoptimalpHof6.2at24℃,30%relativehumidity,16hlight,8hdarkcycleundertheconditionsofculture,themostbeneficialtothefloostsuitableforcallusgroesKNO3contentinMSmediuminfavorofthecallusgroumtemperature

3、,.freelperatureof21℃forthebetter;humidityof50%,suitableforcallusaccumulationoffreshiditysuitablefordifferentiationofadventitiousbudsandroot;darkcultureconducivetotheaccumulationoffreshperature;Humidity;Illumination红花为菊科一年或二年生双子叶草本植物，喜温暖、干燥气候，抗寒性强，耐盐碱。红花全身是宝

4、，花、籽粒、茎叶、秸秆等均可综合利用，是一种集药材、油料、染料为一体的特种经济作物1。由于红花无性快繁体系很难建立，并且目前国内对红花离体培养的研究很少，因此本文通过改变不同的培养条件来研究红花无性快繁体系的建立，以期有利于红花的资源保护、扩大繁殖和进一步推广应用。1材料与方法1.1材料红花种子由新疆塔城种子公司提供;实验以采收后1年后的红花种子不同日龄无菌苗子叶作为外植体。1.2方法红花种子，经70%酒精清洗30s，0.1%升汞表面灭菌10min,无菌水洗4～5次，接种到种子萌发培养基:1/2MS+1.5%

5、蔗糖+1mg·L-1GA中，取接种7日龄的红花无菌苗子叶作为外植体,分别接种至含有不同碳氮源、不同pH值、不同温度、不同湿度和不同光照的愈伤组织诱导培养基和中;培养一段时间后，测定愈伤组织的鲜重增长量。子叶完全愈伤化以后，将其转入不同pH值的分化培养基中，诱导不定芽的产生。设置不同的温度梯度和不同光照强度的条件，培养25d后，观察不定芽的形成情况，观察分化情况，待不定芽形成以后，将其移至生根培养基中，每20d继代1次，观察生根情况。2结果2.1碳源在红花愈伤组织生长过程中的作用碳源既是重要的能源物质，也是一种

6、重要的渗透压调节物质，对植物离体形态发生起着非常重要的作用。而碳源的主要提供形式是糖类物质，其中以蔗糖最为普遍，蔗糖是植物体内糖类运输的主要形式，也是某些植物贮藏的主要化合物。有研究认为，蔗糖的浓度对于组织培养很重要，适当的浓度对于维持培养基渗透势，提高植物组培再生频率具有重要意义。因此，本实验探讨了不同的蔗糖浓度在红花脱分化过程中起的作用，分别取1%～7%的蔗糖添加到培养基中，结果见图1，以红花愈伤组织鲜重增长量计算，培养基中加入的蔗糖含量在1%～3%范围内，鲜重增长量呈上升状态，蔗糖含量在3%～7%范围内

7、，红花愈伤组织的鲜重增长量呈下降趋势，蔗糖含量在3%时，愈伤组织鲜重增长量出现峰值，达到6.8g，蔗糖含量低于3%时，在培养初期，鲜重增长迅速，培养后期，鲜重增长缓慢，以致收获时，生物积累量不高，蔗糖含量高于3%时，鲜重增长量明显下降，说明蔗糖含量过高，不利于细胞生物量的积累。图1碳源对红花愈伤组织生长的影响2.2氮源对红花愈伤组织生长的影响培养基成分影响植物离体形态发生的效果，在植物组织培养过程中，KNO3和NH4NO3是两个重要的氮素来源，其含量高低可影响愈伤组织生长、离体形态发生，且不同植物、不同的离体

8、培养时期对KNO3和NH4NO3的需求亦不同。在红花愈伤组织培养基中添加了不同浓度的KNO3和NH4NO3，观察二者对红花愈伤组织、不定芽和生根情况的影响。由表1可知，NO-3和NH4+均有利于细胞生长，当MS培养基中去除NH4NO3，仅加入KNO3时，细胞生长缓慢，不定芽分化率极低，但分化出的不定芽伸长略有伸长;当MS培养基中仅加入NH4NO3，去除KNO3时，细胞生长极其缓慢，对不定芽的分化及生