中药化学成分传统提取分离方法经验浅谈

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时间:2018-07-07

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1、中药化学成分传统提取分离方法经验浅谈实验前1.在从事研究之前一定要认真查阅与课题相关的文献资料。做到心中有数,即怎样来提取是最好的?怎样来解析植物中特征类型的化合物?别人都做了哪些方面的工作了?等等。象我的课题植物主要含有生物碱类成分,我就选择先用稀酸浸泡,再用阳离子交换树脂交换富集,就把叶绿素,多糖等杂质除掉了,同时生物碱含量也提高了,给后来的分离工作带来了很大的帮助。2.天然药物或中药一定要在做之前确定其基原(植物来源)。这很重要,不然会给文献检索带来麻烦。3.要抓重点,学会放弃。因为我觉得一个植物中的化学成分成千上百。我们不可能把它全部拿到,所以我们实

2、验中要拿那些量稍大的、容易拿的。不要上了很久的柱子,分到后面得到的量还不够打谱就不好了。你可以从最后结题剩下的几百个浸膏流份瓶子看到这一点。4.实验过程中要小心每一步,三思而后行。因为你的浸膏来之不易。往往不再给你重来的机会。5.要给自己信心,要敢于想,敢于尝试。第一步1.跑板:在上样之前,你必须熟知你样品是处于什么状态,特别是自己要的化合物的点是处于什么状态,选用什么柱子(粗长砍断;细长快冲纯化除杂),什么固定相(硅胶,正相柱除极性小的化合物;凝胶,一般用于纯化,分离离得较近的点,反相硅胶,除极性大的杂志等)选梯度,淋洗剂的选择。感觉上要使所需点在rf0.

3、2~0.3左右的比较好。不要认为在板上爬高了分的比较开,过柱子就用那种极性,如果rf在0.6,即使相差0.2也不容易在柱子上分开,因为柱子是一个多次爬板的状态,可以通过公式的比较:0.6/0.8一次的分离度,肯定不如(0.2/0.3)的三次方或四次方大。(1)、洗脱剂的选择,一般是以第一个点在TLC上Rf值0.2~0.3为基础,稀释一倍进行第一个样品点的洗脱,并在洗脱下第一个点后更换下一个点的洗脱极性(0.2~0.3稀释一倍)。2.准备工作:准备一个蒸馏瓶,一根滴管(标有样品名字),一些样品瓶,留点母液。3.样品称量:样品的称量是选柱子的标准,所以一定要准确

4、200-300目硅胶,称30-70倍于上样量;如果极难分,也可以用100倍量的硅胶H。4.选柱子:注意跑柱子就是多次跑薄层板的过程,所以让点在薄层板上冒个点就表示你在柱子硅胶里照样能跑出来。(注意给自己标上自己样品名哦)关于柱子的尺寸选柱子根据你样品量为选,应该是粗长的最好。柱子长了,相应的塔板数就高。柱子粗了,上样后样品的原点就小(反映在柱子上就是样品层比较薄),这样相对的减小了分离的难度。试想如果柱子十厘米,而样品就有二厘米,那么分离的难度可想而知,恐怕要用很低极性的溶剂慢慢冲了。而如果样品层只有0.5厘米,那么各组分就比较容易得到完全分离了。当然采用粗

5、大的柱子要牺牲比较多的硅胶和溶剂了。现在见到的柱子径高比一般在1:5~10,书中写硅胶量是样品量的30~40倍,具体的选择要具体分析。如果所需组分和杂质分的比较开(是指在所需组分rf在0.2~0.4,杂质相差0.1以上),就可以少用硅胶,用小柱子(例如200毫克的样品,用2cm×20cm的柱子);如果相差不到0.1,就要加大柱子,我觉得可以增加柱子的直径,比如用3cm的,也可以减小淋洗剂的极性等等。用石英做柱子,然后用HF254做固定相,这样在柱子外面用紫外灯一照就知道产品在哪里了,但没有验证过。5.2.关于湿法、干法上样湿法省事,一般用淋洗剂溶解样品,湿法

6、省事,一般用淋洗剂溶解样品,有些样品溶解性差,能溶解的溶剂又不能上柱(比如DMF,DMSO等,会随着溶剂一起走,显色是一个很长的脱尾),这时就必须用干法上柱了。样品和硅胶的量有一种说法是1:1,我觉得是越少越好,但是要保证在旋干后,不能看到明显的固体颗粒(那说明有的样品没有吸附在硅胶上)。湿法上样,搅成匀浆。加入干硅胶体积一倍的溶剂用玻璃棒充分搅拌。如果洗脱剂是石油醚/乙酸乙酯/丙酮体系,就用石油醚拌;如果洗脱剂是氯仿/醇体系,就用氯仿拌。如果不能搅成匀浆,说明溶剂中含水量太大,尤其是乙酸乙酯/丙酮,如果不与水配伍走分配色谱的话,必须预先用无水硫酸钠久置干燥

7、。氯仿用无水氯化钙干燥,以除去1%的醇。如果样品对酸敏感,不能用氯仿体系过柱。6.装柱。将柱底用棉花塞紧,不必用海沙,加入约1/3体积石油醚(氯仿),装上蓄液球,打开柱下活塞,将匀浆一次倾入蓄液球内。随着沉降,会有一些硅胶沾在蓄液球内,用石油醚(氯仿)将其冲入柱中。干法装柱简单方便,只要垫实即可,保证平面平整。柱子下面的活塞一定不要涂润滑剂,会被淋洗剂带到产品中的,可以采用四氟节门的。干法和湿法装柱觉得没什么区别,只要能把柱子装实就行。装完的柱子应该要适度的紧密(太密了淋洗剂走的太慢),一定要均匀(不然样品就会从一侧斜着下来)。书中写的都是不能见到气泡,我觉

8、得在大多数情况下有些小气泡没太大的影响,加压可以消除

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