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时间:2018-07-07
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1、肿瘤标志物组合在乳腺癌防治中的应用【关键词】乳腺肿瘤;肿瘤标记,生物学 Abstract:ObjectiveToexplorethebesttumormarkerbinationindiagnosisofbreastcancerandtoimprovethediagnosticaccuracyandsensitivity.MethodsTheenzymelinkedimmunosorbentassay(ELISA)cancerantigen15-3(CA15-3),carcinoembryonicantigen(CEA),tumorspecificgroefluore
2、scentquantitativePCR(FQ-PCR)ethodinscreeningbreastcancer. Keys;tumormarkers,biological 近年来研究表明,乳腺癌已是女性健康的危险因素。乳腺癌早期诊断和治疗是防治乳腺癌的关键。关于乳腺癌诊断、疗效评估的手段、指标有很多,如超声影像、免疫组化、相关基因检测等。由于方法的限制,许多实验数据受到主观因素或工作熟练程度的影响,很难标准化,室间实验数据也没有可比性。我们以定量的方法检测敏感性和特异度相对较高的5个标志物:血清肿瘤相关抗原(CA15-3)、癌胚抗原(CEA)、恶性肿瘤特异性生长因
3、子(TSGF)、组织多肽特异性抗原(TPS)、C-erbB2,研究它们在评估乳腺癌发生发展中的作用,特别是找到早期预测乳腺癌的可靠标志物。 1对象与方法 1.1检测对象所有纳入患者105例均为女性,良性组:20例,其中乳腺病6例,乳腺纤维瘤14例,平均年龄36岁。乳腺癌组:共85例,其中浸润性导管癌66例,浸润性小叶癌14 例,髓样癌2例,乳腺浸润性筛状癌3例。采用1997年国际抗癌联盟公布的乳腺癌TNM分类法进行TNM分期,其中Ⅰ期27例,Ⅱ期25例,Ⅲ期19例,Ⅳ期14例,平均年龄44岁。两组病例均于治疗前清晨取静脉血3ml,所有乳腺癌均经病理确诊的初诊者,排
4、除患有其它肿瘤。 1.2检测方法静脉血离心取上清液,ELISA法测CA15-3、CEA、TSGF、TPS,试剂盒购自瑞典CanAg公司和IDL生物试剂公司。原理为生物素-亲和素双单抗夹心法,形成亲和素-生物素-抗体-抗原-酶标抗体复合物,以日本BIO-RAD公司生产的MODEL550用淋巴细胞分离液分离淋巴细胞,异硫氰酸胍-酚-氯仿一步法细胞RNA。以逆转录FQ-PCR法检测。引物由上海生物工程公司合成,正反义引物分别为5’-AGCCGCGAGCACCCAAGT-3’,5’-TTGGTGGGCAGGTAGGTGAGTT-3’,探针:5’-CCTGCCAGATCCCGA
5、CCCACCT-3’。FAM 荧光作为报告基因标记探针5’端,TAMRA荧光为淬灭基因标记3’端。逆转录反应20μl,42 ℃反应55min。FQ-PCR反应,逆转录产物5μl,引物400nmol,探针150nmol,dATP、dGTP dCTP各200μmol,dUTP400μmol,TaqDNA酶1.25u。在美国ABI公司生产的7700Sequencede tector分析仪上进行分析,每份标本均做C-erbB2和β2-微球蛋白测定。扩增参数为:50℃ 2min,95℃10min,94℃0.5min,66℃1min,35次循环。采用BIECHE的标准曲线
6、制备方 法,在每次均使用标准品制备标准曲线。根据曲线,仪器自动计算C-erbB2和β2-微球蛋白 的拷贝数/ml,以C-erbB2和β2-微球蛋白比值作为C-erbB2的表达水平。 1.3判定标准临界值:CA15-3为19.3u/ml;CEA为5.0ng/ml;TSGF为64u/ml;TPS为15.8u/L;C-erbB2为C-erbB2/β-actin1.90,超过临界值为阳性。 1.4统计学方法计量数据以(±s)表示,采用SPSS10.0统计软件,进行t检验,计数资料采用χ2检验。 2结果 2.1良性乳腺疾病组和乳腺癌组CA15-3、CEA、TSGF、T
7、PS、C-erbB2的测定结果见表1。 2.2单项指标对于乳腺癌诊断的评价根据良性对照结果,CA15-3、CEA、TSGF、TPS、C-erbB2对乳腺癌诊断的阳性率分别为51.77%、45.88%、54.12%、38.82%、65.88%,乳腺癌Ⅲ期的阳性率明显高于Ⅰ期(P<0.05),而不同指标在不同期阳性率不同,且存在假阳性,见表2。表1良性乳腺疾病组和乳腺癌组CA15-3、CEA、TSGF、TPS、C-erbB2测定结果表2单项指标用于乳腺癌诊断的评价 2.3联合检测对Ⅰ期和Ⅱ期乳腺癌诊断的评价以上单个肿瘤标志物对乳腺癌
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