人胰高血糖素样肽 期刊论文

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1、人胰高血糖素样肽-1突变体基因原核表达质粒的构建作者：朱清顾云，陆伟，刘梅【摘要】目的：对人胰高血糖素样肽-1（hGLP-1）进行基因突变，构建GST融合蛋白原核表达质粒pGEX-4T/（Val8）hGLP-1，并在大肠杆菌中诱导表达。方法：选择大肠杆菌偏爱密码子，将hGLP-1（7～37）第2位的丙氨酸（Ala8）定点突变为缬氨酸（Val8）直接生物合成4个寡聚核苷酸片段并进行基因拼接，，形成完整的hGLP-1突变体基因（Val8）hGLP-1，并连接到载体pGEX-4T-1，转化大肠杆菌BL21，BamHI与XhoI双酶切电泳鉴定与序列测定，然后诱导表达其融

2、合蛋白。结果：经酶切电泳鉴定与测序分析，证实所合成的突变体基因（Val8）hGLP-1已克隆到pGEX-4T-1中，经SDS-PAGE分析可以诱导表达出融合蛋白。结论：成功地构建了GST融合蛋白原核表达质粒pGEX-4T/（Val8）hGLP-1，为进一步获得重组hGLP-1蛋白奠定基础，为产业化规模制备hGLP-1突变体提供实验依据。【关键词】人胰高血糖素样肽-1；融合蛋白；基因突变；克隆；糖尿病ConstructionofexpressionvectorofhumanGlucagon-likepeptide-1mutantgeneAbstractObject

3、ive:ToobtainthemutantgeneofhumanGlucagon-likepeptide-1hGLP-1constructtheexpressionvectorofpGEX-4T/（Val8）hGLP-1andexpresstheGSTfusionproteininE.colicells.Methods:WiththepreferentialcodonofE.colibeingselectedfouroligonucleotidefragmentsweredirectlybiosynthesizedthenweresplicedtoformaco

4、mpletemutantgeneofhGLP-1whichchangedthecodonforthesecondaminoacidofhGLP-1737-alanineAla8intovalineVal8bymeansofsite-directedmutagenesissoitnamed（Val8）hGLP-1.ThemutantgenewasinsertedintothevectorpGEX-4T-1withBamHIandXhoIrestrictionsites.TherecombinantplasmidofpGEX-4T/（Val8）hGLP-1wastr

5、ansformedintoE.colicellsBL21thenidentifiedbyelectrophoresisafterenzymedigestionandtestifiedbyDNAsequencingfurtherinducedtoexpressthefusionproteinbyIPTG.Results:TheresultsofelectrophoreticanalysisandDNAsequencingconfirmedthatthesyntheticmutantgeneVal8hGLP-1hadbeenclonedintothepGEX-4T-

6、1successfullyandinducedexpressionoffusionproteinbySDS-PAGEanalysis.Conclusion:TheGSTfusionproteinexpressionplasmidofpGEX-4T/Val8hGLP-1wassuccessfullyconstructed，whichlaidthefoundationforfurtherobtainingrecombinanthGLP-1mutantforexperimentalorclinicalstudiesandprovidedthetechnicalrout

7、esofindustrialization.KeywordsHumanGlucagon-likepeptide-1FusionproteinGenemutationCloningDiabetesmellitus人胰高血糖素样肽－1（humanglucagon-likepeptide-1hGLP-1）是由人胰高血糖素基因编码、并由肠道L细胞分泌的一种肽类激素，它是随着食物在肠道的消化吸收过程而分泌的，其功能由hGLP-1受体hGLP-1R介导，是目前能诱导胰岛素分泌的最强物质之一，还能以同样的强度抑制胰高血糖素的分泌，它促胰岛素分泌的作用具有葡萄糖依赖性，随着葡萄

8、糖浓度降低，其促胰岛素分