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1、极低频率电磁场对离体肿瘤细胞的诱导凋亡作用论文【摘要】目的探讨极低频率电磁场对体外培养肿瘤细胞的抑制作用。方法将人成骨肉瘤细胞（MG63）、乳腺癌细胞（MCF7）和肝癌细胞（HepG2）接种到96孔板中,并置于磁场强度分别为10mT、20mT、40mT、60mT的磁场中进行干预，每天刺激2次，每次1h，作用3天，同时每种细胞设置正常条件下的对照组。3天后以MTT法检测细胞活性(OD值)，并采用流式细胞技术（AnnexinV—FITC和PI双标）检测3种细胞的凋亡情况。结果72h后以MTT法检测3种细胞的OD值，并于正常对照组进行比较，SPSS软件统计
2、结果显示.freelT、20mT、40mT、60mT，刺激时间为每天2次，每次持续1h。3天后每孔加入MTT溶液20μl，继续孵育4h后终止培养。小心吸弃上清液，每小孔加入DMSO150μl融解结晶物，振荡10min后在酶标仪上测定各孔的吸光值。1.2.3流式细胞仪检测各组3种肿瘤细胞凋亡的比例磁场强度及磁场作用的时间和方法同前。磁刺激停止后，胰酶消化细胞并调整细胞浓度为1×106个/ml。取1ml细胞1000r/min4℃离心10min，弃上清；加入1ml4℃的PBS轻轻振荡使细胞悬浮，1000r/min4℃离心10min后弃上清，重复本步骤共3次
3、；将细胞悬浮于250μl的结合缓冲液中，取100μl的细胞悬液于5ml流式管中，加入5μlAnnexin－Ⅴ／FITC和10μlPI溶液，混匀后室温避光孵育15min，在反应管中加入400μl的PBS后，流式细胞仪（FACS）检测分析。每组取5样本,每样本计数1×106个细胞,并计算其阳性率。在480nm的激发光下，检测3种肿瘤细胞凋亡细胞占细胞总数的比例。1.3统计学处理实验结果以±s表示,采用SPSS11.0统计软件，应用单因素方差分析进行统计学处理。2结果2.1各组肿瘤细胞生长形态观察干预后至72h,磁场各组和对照组肿瘤细胞均有明显的生长,正常
4、组细胞体积饱满，细胞密集；磁场组细胞体积较正常组小,.freelT组），其中MG63和MCF7均在20mT出现最大抑制率（分别为34.82％、31.06％），而HepG2在60mT出现最大抑制率（19.69％）。经SPSS软件方差分析，各磁场组与对照组间差异有显著性意义（P0.05），各磁场强度组间差异无显著性意义(P0.05)。表1三种肿瘤细胞OD值注：与正常组比较，*标记：P0.05表2磁场对肿瘤细胞生长抑制率2.3流式细胞仪检测结果对于流式细胞检测，本实验是基于MTT的结果上进行的，即在3种肿瘤细胞在MTT检测上出现最大抑制率的磁场条件下进行的
5、流式细胞术分析。每个条件取5个样本管，并设置正常条件下的对比组，见图1～4，如在同一种条件下，其正常对照组的细胞凋亡率大于5％，则考虑有其他因素影响本实验结果，这样的样本管放弃统计。其结果数据用±s表示，见表3。表3不同磁场强度对3种肿瘤细胞的抑制3讨论国内外许多学者研究了磁场对荷瘤动物的免疫力和离体肿瘤细胞的生物性状影响1,2。其使用磁场类型和强度不同,所产生的生物学效应也不尽相同。并且,即使在相同的磁场条件下,不同的肿瘤细胞可产生不同的效果，我们在预实验中发现50Hz的交变磁场对体外培养的肿瘤细胞有抑制作用3。为进一步探讨磁场对多种肿瘤细胞的作用
6、,我们选择3种肿瘤细胞在多种磁场强度下作用,并对其结果作如下分析：从我们的实验可以看到，磁场对多种肿瘤细胞均有明显的抑制作用。Santi等4亦在实验中证明磁场可抑制肿瘤细胞的生长,并可显著延长荷瘤裸鼠的寿命，而在实验的过程中，我们进一步观察到，磁场对肿瘤细胞的抑制作用主要为诱导肿瘤细胞的凋亡,而并非杀伤作用。在培养的过程中,如果培养的周期超过一定的时间期限（如10天）,则3种肿瘤细胞在4种磁场强度作用下和正常的肿瘤细胞在MTT检测及流式检测上并无明显的差异(P0.05)。因为一旦肿瘤细胞的生长速度超过了磁场对其的抑制作用，过长时间的培养结果将是肿瘤细
7、胞长满整个培养瓶。我们选择对数生长期细胞用MTT和流式细胞术两个方面检测肿瘤细胞的凋亡。磁场对肿瘤细胞的诱导凋亡作用也并非与磁场的强度呈简单的线性比例关系。在实验中观察到，当磁场的强度过小（磁场强度＜1mT）,实验中的3种肿瘤细胞在MTT和流式检测上并没有明显的差异性；而当磁场的强度过大时，磁场也将影响到正常细胞的分裂过程，对其构成成直接的损伤作用5，这种过强的磁场强度,其治疗肿瘤作用的可行性值得怀疑，我们的实验可以看到,不同的细胞在某一种磁场强度下,其诱导凋亡的作用最大，其中MG63和MCF7均在20mT出现最大抑制率（分别为34.82％、31.0
8、6％），而HepG2在60mT出现最大抑制率（19.69％）。我们只是讨论了3种肿瘤细胞的参考值,而多种肿瘤
