梓醇对大鼠阿霉素心肌损伤的保护作用及其抗氧化机制研究

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1、梓醇对大鼠阿霉素心肌损伤的保护作用及其抗氧化机制研究【关键词】梓醇;心肌损伤;氧自由基;抗氧化;阿霉素　阿霉素(adriamycin,ADR)是疗效肯定的抗肿瘤药,但临床和实验发现长期使用可产生严重的心脏毒性,其机制之一是阿霉素产生自由基导致心肌损伤[1]。梓醇(catalpol)为一种环烯醚萜类小分子化合物，富含于中药地黄中，动物实验证实其具有拮抗细胞凋亡、抗炎、抗氧化应激等多种生物学作用[2～5]。已有研究表明梓醇可抑制氧化应激引起的PC12细胞损伤，对神经系统具有保护作用[6]，但梓醇对氧化应激引起的心脏损伤未见报道。鉴于阿

2、霉素的毒性是其产生自由基致使心肌损伤这一机制,本实验研究梓醇通过其抗氧化作用对阿霉素心肌病的保护作用。通过测定大鼠血清中乳酸脱氢酶(LDH),谷草转氨酶(AST),肌酸激酶(CK)的活性,心肌组织中的超氧化物歧化酶(SOD)，谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性以及脂质过氧化物(MDA)含量,以探讨梓醇对ADR所致大鼠心脏毒性的保护作用，从而进一步证实梓醇通过清除和抑制自由基而保护心肌组织。　　1材料　　梓醇(catalpol)购自中国药品生物制品检定所;SD大鼠由辽宁医学院动物中心提供,雄雌各半,体质量(220±20)g;A

3、DR为浙江海正药业股份有限公司生产,用前生理盐水配成所需浓度。LDH，AST，CK试剂盒由北京中生试剂厂提供,在CB171,TRACE半自动生化分析仪中检测。SOD，GSH-Px及MDA测定试剂盒购自南京建成生物工程研究所;蛋白质测定用考马斯亮蓝法,所用仪器为日立721型分光光度计。　　2方法　　2.1给药方案大鼠50只,随机分为5组，每组10只。正常对照组,ip等体积生理盐水;ADR组:腹腔注射ADR，每次2.5mg/kg，4次/周，连续2周，累积剂量为20mg/kg[7];其余3组为ADR+梓醇合用组：ADR剂量同ADR组，A

4、DR+梓醇2，5，10mg/kg组。梓醇按上述剂量,用生理盐水配制相应浓度，于给予ADR前1周给药，每天1次ip给药，共计20d。　　2.2血清中LDH、AST、CK的测定于最后一次给梓醇24h后，实验鼠用氨基甲酸乙酯麻醉(1g/kg)，颈动脉取血，分离血清，冰箱保存,24h内于自动生化分析仪上测定LDH,AST,CK活性。　　2.3心肌中SOD活性、GSH-Px活性、MDA含量的测定采血后大鼠解剖，立即取心尖部肌肉，以0.15mol/LKCl为介质，于玻璃研磨器中制成10%匀浆，冷冻离心(0～4℃,4000r/min)10min

5、，取上清液测定蛋白质后按试剂盒说明分别测定SOD活性、GSH-Px活性及MDA含量。　　2.4统计学分析数据均以±s表示，采用SPSS13.0统计软件进行单因素方差分析及LSD法进行统计学处理，认为P<0.05有显著性差异，P<0.01有非常显著性差异。　　3结果　　3.1梓醇对心肌LDH、AST、CK活性影响见表1。显示ADR组LDH、AST、CK活性均比正常对照组高(P<0.01)，说明该剂量已对大鼠心脏构成损伤，“心肌酶谱”大量外流。梓醇干预后“心肌酶谱”逐渐回落，存在剂量依赖性，显示了梓醇保护心脏的保护作

6、用　表1梓醇对给予ADR后大鼠血清中LDH、AST、CK活性的影响　　3.2梓醇对心肌SOD活性、GSH-Px活性、MDA含量的影响见表2。显示ADR组SOD、GSH-Px活性下降(P<0.01)，MDA含量上升(P<0.01)，说明ADR通过生物转化生成超生理量的自由基，消耗了自由基清除酶，使酶含量降低，自由基清除障碍，过氧化反应增强，攻击膜结构，产生大量的MDA，因而其含量上升。当动物给予梓醇后情况向相反方向转化,SOD、GSH-Px逐渐上升，MDA含量回落，说明梓醇通过清除自由基，抑制过氧化反应，从而提高自由基清

7、除酶活性。　　4讨论　　ADR对心脏的毒性作用主要是ADR的醌结构在心肌中经黄素脱氢酶和含蛋白系统电子传递，与分子氧反应产生半醌自由基和超氧阴离子(O-2·)、羟自由基(·OH)等[8]。这些自由基引发细胞膜过氧化反应，使蛋白和磷脂之间发生交联，改变膜结构。有报道证实ADR中毒大鼠心肌病理切片显示心肌细胞明显浊肿,胞浆质空泡变性,间质明显充血水肿及横纵纹不清等[9]。本研究表明随着ADR在动物体内累积,心脏损伤加重,细胞内成分大量外漏及脂质过氧化物生成。ADR组的LDH，AST，CK均较对照组为高(表1),显示了ADR的毒性作用。

8、当给予动物梓醇时,情况发生逆转化,随着梓醇给予量的增加，LDH，AST，CK回落，说明细胞膜得到了修补，外漏减少，显示了梓醇的抗氧化及保护心脏作用。尽管LDH，AST，CK可来自各种组织，当同时测定血清3种酶活性，在一定程度上反映心脏受损程度,因此