转录因子sp1对成肌细胞中猪skip表达调控作用

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1、转录因子Sp1对成肌细胞中猪SKIP表达调控作用摘要：利用基因组ＰＣＲ步移方法获得猪ＳＫＩＰ转录起始位点上游２０７５ｂｐ启动子序列。生物信息学分析发现该序列中存在４个Ｓｐ１结合位点和１个ＣｐＧ岛。将启动子序列构建到ｐＧＬ３－ｂａｓｉｃ的双荧光素酶报告基因载体上，再利用ＲＮＡ干扰技术分析转录因子Ｓｐ１对ＳＫＩＰ转录的影响。荧光素酶活性分析发现Ｓｐ１的表达抑制使成肌细胞中ＳＫＩＰ启动子活性显著下降，表明转录因子Ｓｐ１可能通过顺式作用元件ＧＣ－Bｏｘ对成肌细胞分化过程中ＳＫＩＰ基因的转录激活起正向调控作用。关键词：Ｓｐ１；猪；ＳＫＩＰ；启动子活性；ＲＮＡ干扰中图分类号：Ｑ７８９文献标识码：Ａ文章编

2、号：0439－８114（２０12）18－4147-05RoleofTranscriptionFactorsSp1intheExpressionalRegulationofSKIPGeneinPorcineC2C12MyoblastsＸＩＯＮＧＱｉ１，ＣＨＡＩＪｉｎ２，ＺＨＡＮＧＮｉａｎ１，ＳＵＯＸｉａｏ－ｊｕｎ１，ＬＩＸｉａｏ－ｆｅｎｇ１，ＹＡＮＧＱｉａｎ－ｐｉｎｇ１，ＬＩＵ6Ｙａｎｇ１，ＣＨＥＮＭｉｎｇ－ｘｉｎ１（１．ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＡｎｉｍａｌＨｕｓｂａｎｄｒｙａｎｄＶｅｔｅｒｉｎａｒｙ／ＨｕｂｅｉＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＡｎｉｍａｌＥｍｂｒｙｏＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇａｎｄＭ

3、ｏｌｅｃｕｌａｒＢｒｅｅｄｉｎｇ，ＨｕｂｅｉＡｃａｄｅｍｙｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｗｕｈａｎ４３００６４，Ｃｈｉｎａ；２．ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＡｎｉｍａｌＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＨｕａｚｈｏｎｇＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ／ＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＡｎｉｍａｌＧｅｎｅｔｉｃｓ，ＢｒｅｅｄｉｎｇａｎｄＲｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆＭｉｎｉｓｔｒｙｏｆＥｄｕｃａｔｉｏｎ，Ｗｕｈａｎ４３００７０，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｇｅｎｏｍｅｗａｌｋｉｎｇｔｅｃｈｎｉｑｕｅｗａｓｕｓｅｄｔｏｃｌｏｎｅｔｈｅｐｒｏｘｉｍａ

4、ｌｐｒｏｍｏｔｅｒｒｅｇｉｏｎｏｆｐｏｒｃｉｎｅＳＫＩＰ．Ａｆｒａｇｍｅｎｔｏｆ２０７５ｂｐｕｐｓｔｒｅａｍｓｔａｒｔｃｏｄｅｗａｓｏｂｔａｉｎｅｄｆｒｏｍｇｅｎｏｍｉｃＤＮＡｏｆｐｏｒｃｉｎｅ．Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ6ａｎａｌｙｓｉｓｒｅｖｅａｌｅｄｔｈａｔｉｔｈａｄ４Ｓｐ１ｂｉｎｄｉｎｇｓｉｔｅｓａｎｄｏｎｅＣｐＧｉｓｌａｎｄ．TｈｅｃｌｏｎｅｄＳＫＩＰｐｒｏｍｏｔｅｒｗｅｒｅｃｌｏｎｅｄｉｎｔｏｔｈｅｕｐｓｔｒｅａｍｏｆｐＧＬ３－ｂａｓｉｃｔｏａｎａｌｙｚｅｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆＳｐ１ｏｎＳＫＩＰｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｃｔｉｖｉｔｙｂｙＲＮＡｉｔｅｃｈｎｉｑｕｅ．Ｌｕｃｉｆ

5、ｅｒａｓｅａｃｔｉｖｉｔｙａｎａｌｙｓｉｓｉｎｄｉｃａｔｅｄａｄｅｃｒｅａｓｅｉｎＳＫＩＰｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌａｃｔｉｖｉｔｙthroughｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｆａｃｔｏｒＳｐ１ｉｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｎｇＣ２Ｃ１２ｍｙｏｂｌａｓｔｓ．ＴｈｅｓｅｒｅｓｕｌｔｓｓｕｇｇｅｓｔｅｄｔｈａｔｔｈｅｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｆａｃｔｏｒＳｐ１ｐｌａｙｅｄａｐｏｓｉｔｉｖｅｒｅｇｕｌａｔｏｒｙｒｏｌｅｉｎＳＫＩＰｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｐｏｓｓｉｂｌｙｂｙＧＣｅｌｅｍｅｎｔｓｉｎｍｙｏｔｕｂｅｓ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｓｐ１；ｐｏｒｃｉｎ

6、ｅ；ＳＫＩＰ；ｐｒｏｍｏｔｅｒａｃｔｉｖｉｔｙ；ＲＮＡｉ6interference骨骼肌纤维是骨骼肌的主要组成部分，肌纤维的数量和大小直接影响家畜的胴体性状，与遗传因素相关。５′肌醇磷酸酶（ＳＫＩＰ）由Ｉｊｕｉｎ等［１］首先发现并分离，在各组织中广泛表达，尤其在心脏、骨骼肌和肾脏中高表达，因此ＳＫＩＰ被称为骨骼肌和肾脏富含的５′肌醇磷酸酶。通过人与猪比较图谱，发现猪的ＳＫＩＰ定位在猪１２号染色体ＳＳＣ１２ｑ１．３上。其所在位置存在影响第１０肋骨背膘厚、胴体长［２］、肌纤维数量［３］和大腿重［４］的ＱＴＬ区域。运用牛基因图谱信息，发现牛ＳＫＩＰ定位在１９号染色体ＢＴＡ１９ｑ１．３上，其所在位置

7、存在影响犊牛出生重［５］的ＱＴＬ区域。ＳＫＩＰ杂合突变小鼠比目鱼肌和股四头肌的重量显著提高［６］也印证ＳＫＩＰ具有调节骨骼肌纤维发育的功能。因此有必要进一步研究该基因参与骨骼肌生长发育的表达调控机制，为弄清楚肌纤维的生长发育规律奠定基础。１材料与方法１．１材料限制性内切酶、Ｔ４连接酶、反转录试剂盒等购自Ｆｅｒｍｅｎｔａｓ－ＭＢＩ公司；ＴａｑＤＮＡ聚合酶、ＳＹＢＲＧｒｅｅｎＲｅａｌ－ＴｉｍｅＰＣＲＭａｓｔｅｒＭ