枸杞多糖对ccl4引起的建鲤急性肝损伤的保护作用

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1、枸杞多糖对CCl4引起的建鲤急性肝损伤的保护作用　　肝脏是鱼体内最大的实质性器官，其功能很强大，对来自体内外的许多非营养性物质，如各种药物、毒物以及体内某些代谢产物等有生物转化作用［1］，具有很好的解毒功能和代谢功能，因此，肝脏更容易受到外环境、病毒、细菌等因素的影响。目前，随着集约化养殖的不断发展，难免会出现对鱼类日常管理的疏忽，如强化投饲和乱用药物，饲喂霉变饲料等［2］，而这些因素会对鱼类肝脏造成比较严重的损害，出现以肝胆综合症为主要特征的鱼类疾病，即所谓的鱼类肝病(Theliverdiseaseoffishes)［3］。关于本病，并没有有效地治疗药物，死亡率较高，且治疗主

2、要是以西药为主，而西药容易出现药物残留等问题，会间接影响鱼的品质，进而影响到人类的健康，因此研究开发出绿色环保的中成药就显得迫在眉睫。　　近年来，由于中草药具有绿色无污染、毒副作用小，以及能够提高机体的免疫和防御功能等特点［4］，现已广泛的应用于水产动物的病害防治及健康养殖中［5－6］。枸杞(LyciumchinenseMill-er)为茄科枸杞属(LyciumLinn．)植物，含有多糖、粗蛋白、亚油酸等多种营养成分，而枸杞多糖(Lyciumbarbarumpolysaccharide，LBP)为枸杞中的主要活性成分之一［7］。现代药理研究表明，枸杞多糖具有护肝、保护生殖系统、

3、降血脂、降血糖、免疫调节等多种功能［8－11］。目前，关于枸杞多糖的研究报道主要有:王远吉［12］研究发现，枸杞多糖可以提高鲫鱼血清溶菌酶活力，且与枸杞多糖呈浓度依赖性关系。宋毅等［13］研究发现，枸杞多糖可以增强机体非特异性免疫功能。然而，水产领域有关枸杞多糖的保肝作用却鲜有报道。　　四氯化碳(CCl4)作为一个评价天然药物保肝作用的肝毒性模型药物，已广泛应用于科学研究当中。本研究以化学药物CCl4来进行造模，通过测定一些肝功能生化指标的变化来评价枸杞多糖对建鲤急性肝损伤的保护作用，为枸杞多糖在水产肝胆疾病的防治提供理论依据。　　1材料与方法　　1．1材料　　1．1．1供试鱼

4、　　建鲤来自于中国水产科学院淡水渔业研究中心渔场，体质健康，6月龄，大小规格基本一致，150g左右，饲养于循环水系统中，25oC，商品饲料(40%粗蛋白、10%粗脂肪、10%灰分、能量21KJg－1DM)饲喂一周，每天投喂2次。　　1．1．2药品和试剂　　枸杞多糖(Lyciumbarbarumpolysaccharide，LBP)购自南通四海植物提取有限公司。谷丙转氨酶(GPT)、谷草转氨酶(GOT)、乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物岐化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)、白蛋白(Alb)、谷胱甘肽(GSH)及总抗氧化能力(T

5、-AOC)等试剂盒购自于南京建成生物工程研究所科技有限公司;总蛋白(TP)测定试剂盒购自于碧云天生物技术研究所。CCl4(分析纯)购于国药集团化学试剂有限公司。　　1．2方法　　1．2．1枸杞多糖的提纯　　枸杞多糖通过经典的水煮醇沉方法［14－15］分离提纯:取300g粗枸杞多糖室温下浸润于1000mL超纯水中过夜处理，然后加热煎煮2h用定性滤纸过滤除去不溶杂质，上清液进行离心(500g，10min)，再用0.22μm的过滤器进行过滤，将上清液收集起来，用乙醇进行3次沉淀。　　其间有絮状沉淀产生，静置1h，将静置后固形物依次以95%乙醇、无水乙醇、丙酮洗涤除杂，待絮状沉淀

6、分离出来后，转速2500rmin－1，离心时间3min，95%乙醇洗涤沉淀3次，在温度为80oC的烘箱中烘干。　　1．2．2分组及处理　　将循环水系统内饲养1周的建鲤随机分为6组，分别设为空白对照组(CK)、模型组(CCl4)、枸杞多糖药物对照组(LBPCK)、处理组(枸杞多糖0.1，0.5，1.0gkg－1组)，其中CK组及CCl4模型组:饲喂普通商品饲料;枸杞多糖药物对照组(LBPCK):饲喂含1.0gkg－1枸杞多糖的饲料;处理组:分别饲喂含0.1，0.5，1.0gkg－1枸杞多糖的饲料。每天投喂2次，每次投喂量为试验鱼质量的2%。饲喂60d后，Ctrl组及LBPCtrl

7、组腹腔注射橄榄油，CCl4组及加药处理组经腹腔注射含30%CCl4的橄榄油，每10g鱼注射0.05mL，注射72h后采肝组织及血样。　　1．2．3样品处理　　　　(1)制备血清。所有试验鱼经尾部静脉采血后，血样于5000rmin－1离心5min，收集血清，－20℃储藏备用，测定TP、GOT、GPT、LDH、Alb等生化指标。　　(2)制备肝组织匀浆。采血后试验鱼解剖取肝，置于预冷生理盐水中漂洗，滤纸拭干后按肝重∶生理盐水体积=1∶9的比例加入生理盐水后匀浆研磨，3000rmin－1离心10m