两种凝血酶原提取方法的比较论文

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1、两种凝血酶原提取方法的比较论文赖翼吴民泸代娟陈曼段佳慧刘阳【摘要】目的比较等电点沉淀法和柠檬酸钡吸附法从猪血浆中提取凝血酶原的纯度。方法分别采用等电点沉淀法和柠檬酸钡吸附法从猪血浆中提取凝血酶原，凝血酶原经单独钙离子激活得到凝血酶，通过凝血酶效价测定、蛋白质浓度测定，计算出凝血酶的比活性。结果采用等电点沉淀法提取的凝血酶原经激活后得到的凝血酶比活性为11.01±1.54U/mg，采用柠檬酸钡吸附法提取的凝血酶原经激活后得到的凝血酶比活性为130.17±12.30U/mg，经配对T检验，P＜0.01.结论与等电点沉淀法相比，采用柠檬酸钡吸附法从猪血

2、浆中提取得到的凝血酶原纯度更高。【关键词】凝血酶原；凝血酶；等电点沉淀法；柠檬酸钡吸附法【Abstract】ObjectiveToparethepurityofprothrombinpurifiedbymethodofprecipitatingatisoelectricpointandadsorptionmethodcitratefrombloodplasmaofpig.MethodsProthrombinethodofprecipitatingatisoelectricpointandadsorptionmethodcitratefromblo

3、odplasmaofpigandactivatedbyCa2+onlytothrombin.Thenthetiterofthrombinandtheconcentrationofproteineasuredtogetthespecificactivityofthrombin.ResultsThespecificactivityofthrombinactivatedbyCa2+fromprothrombinpurifiedbymethodofprecipitatingatisoelectricpointg.Thespecificactivityof

4、thrombinactivatedbyCa2+fromprothrombinpurifiedbyadsorptionmethodcitrateg.Thespecificactivitiesbinpurifiedbyadsorptionmethodcitrateishigherthanpurifiedbymethodofprecipitatingatisoelectricpoint.【Keybin；thrombin；methodofprecipitatingatisoelectricpoint；adsorptionmethodcitrate凝血酶是

5、参与机体凝血过程的一个重要的凝血因子.freelol/LBaCl2溶液；溶液B：0.02mol/LTris，0.15mol/LBaCl2，0.10mol/LNaCl，pH7.4；溶液C：0.02mol/LTris，0.10mol/LNaCl，0.20mol/LNa2EDTA，pH7.4；溶液D：0.02mol/LTris，0.15mol/LNaCl，pH6.5.1.3主要仪器GEGeneQuant1300核酸蛋白分析仪。1.4方法1.4.1凝血酶原提取将收集到的5份猪血浆按1～5编号，各均分为2份，其中1份采用等电点沉淀法提取凝血酶原，另1份采用

6、柠檬酸钡吸附法提取凝血酶原。1.4.1.1等电点沉淀法猪血浆用蒸馏水稀释10倍，用5%冰乙酸将其pH调至5.3，4℃静置过夜，3000r/min离心15min，弃上清，沉淀用生理盐水溶解，过滤备用。1.4.1.2柠檬酸钡吸附法猪血浆中加入溶液A，体积比为10∶1，4℃搅拌30min，静置30min后，3000r/min离心30min，弃上清。沉淀用溶液B洗涤，3000r/min离心15min，弃上清。重复洗3次。沉淀用溶液C解吸附，4℃搅拌0.5～1h，3000r/min离心15min取上清。上清液用溶液D于4℃透析过夜。3000r/min离心1

7、5min取上清液，即为凝血酶原溶液。1.4.2凝血酶原激活用2%Na2CO3溶液将凝血酶原溶液的pH调至7.1，加入0.25mol/LCaCl2溶液，使Ca2+终浓度为0.03mol/L，再用2%Na2CO3溶液将凝血酶原溶液的pH调至7.1，室温静置2h，过滤即得凝血酶溶液。1.4.3凝血酶比活性测定根据文献［4］提供的方法配制0.1%纤维蛋白原溶液。凝血酶效价测定［4,5］：取凝血酶标准品，用生理盐水配制成效价(U/mL)分别为5、6、7、8、9、10的标准品溶液。另取1×10cm的塑料试管6支，各加入0.1%纤维蛋白原溶液450μl，置37

8、℃水浴预热5min，再分别取已37℃预热的上述6个浓度的标准品溶液各50μl，迅速加入上述各试管中，立即计时并摇匀，记录凝固时间。每个浓