菟丝子保护人精子冻存的初步研究

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1、菟丝子保护人精子冻存的初步研究【摘要】目的中医具有完整的理论体系和大量的临床经验及有效药物，并在实践中证明确有成效。设想能利用中医理论指导，在中药中进行筛选精子冻存保护剂，不仅对辅助生殖具有重要意义，而且对发展现代中医，向多领域渗透以及对不育症患者都具有重要实用价值。方法采用配对比较的实验方法。先通过预试验，选择相对较好的菟丝子液的浓度，为了减少多因素对实验的影响，保护液以甘油为主，并以三过蒸馏水、生理盐水、菟丝子水提浓缩液进行配置，保护液中的甘油含量均为14%，以是否含有菟丝子液区分为对照组与实验组保护液。并对数据结果进行统计

2、，用配对t检验分析。结果根据24份精液标本的检测数据，用SPSS软件进行配对组间分析，对两组精液标本的精子活率（a+b+c）进行统计比较，t=2.68,P0.01，差异有显著性；对两组精液标本的精子活力（a+b）进行统计比较，t=2.45,P0.05,差异具有显著性。结论根据研究的统计结果，表明菟丝子在保护精子免受冷冻损伤方面具有一定的应用价值，既可以提高冻存后精子的整体活率（P0.01），也可以增强精子冻存后的活力（P0.05）。本实验为中医药与精子冻存相结合的广泛研究提供了可行性事例；开创了中医与辅助生殖之间新的结合点。【关

3、键词】人精子冻存精子冷冻液菟丝子中医菟丝子是男科临床治疗不育症的常用中药，男科经常使用的保精片、萆菟汤、聚精汤系列方、菟丝子丸等都有菟丝子组成，且在男科不育症的治疗中效果较好。为了进一步验证菟丝子对精子的作用和扩展中医药在生殖领域的使用范围，加以人精子冷冻解冻中涉及中医药报道者极为少见，我们根据传统中医药学的基本理论，将温肾阳中药菟丝子放在人精子冷冻保护液领域中加以应用性地研究与探索，获取其保护人精子免受冻存损伤的效果。　　1材料1.1精液标本精液标本均由南京医科大学生殖实验中心提供，鉴于精液冻存的实际需要和辅助生殖的科学发展水

4、平，对精液标本的质量未作过高要求。由于未见到相关的标准，只是根据临床的实际情况，由个人私自制定。具体理由如下：目前的辅助生殖技术已可以实现卵胞浆内单精子注射，意思也可以理解为，从理论上只要有一个精子，就可以实现生殖愿望，加之部分病人的精子量，即使是在治疗阶段，依然会逐渐减少，而冷冻储藏人精子的目的就是为了辅助生殖或生殖保险的需要。原则上，只要病人有正常的精子就可以为其冻存，而本次实验的结果不会受到精液标本参数的太大影响，所以，采用了折中的办法。精液标本的纳入要求：精液量>2ml；精子密度大于每毫升1千万；活力a+b>

5、25%；畸形率30%。1.2菟丝子提取液的制备菟丝子药材由江苏省中医院药材科提供（厂商：安徽井泉集团中药饮片有限公司；批号：20060601），根据中药制剂的要求，在未知中药的具体有效成分的情况下以水提取物为宜，具体加工步骤如下。1.2.1煎煮水提取干净菟丝子适量，加8倍蒸馏水浸泡30min，武火煮沸,文火再煮30min,滤布过滤,滤渣再加5倍量水同上法再处理2次,各煮沸30min,合并3次滤液。1.2.2沉淀净化用冰箱静置沉淀，去除悬浮粒子（24h）。1.2.3浓缩滤液于70℃水浴中浓缩至0.5g/ml(每m1药液相当于0.5

6、g生药量)，冷藏保存备用。1.3试剂及设备甘油（国药集团化学试剂有限公司，批号：F20060426），三过蒸馏水、生理盐水（南京医科大学生殖中心提供）；ACRO精子计数板，恒温水浴箱，冻存管，4℃冰箱，-80℃冰箱，液氮罐等。1.4人精子冷冻保护液为了减少多因素对实验的影响，保护液以甘油为主，并以三过蒸馏水、生理盐水、菟丝子水提浓缩液进行配置，保护液中的甘油含量均为14%，以是否含有菟丝子液区分为对照组与实验组保护液，并对保护液的酸碱度与渗透压进行测定。　　2方法采用配对比较的实验方法，将每一份经过检测的精液标本分为2份，一份放

7、入对照组，另一份放入实验组，在每一份精液中加入等量的精子冷冻保护液并进行冷冻-低温存储-解冻复温等操作。具体操作流程如下。2.1预试验通过预试验，选择相对较好的菟丝子液的浓度。用菟丝子液配置不同浓度的冷冻保护液，放入等量的相同精液标本，进行多次反复，选出保护精子效果较好的浓度，为正式试验的试剂配置作准备。2.2正式试验2.2.1流程设计准备好各种试剂及设备后，进行操作流程设计，确定各个过程所需要的时间，计算好需要的各种数据，设定要防止的偏差，估计操作过程中可能出现的问题及差错，一并拟定好相应的补救措施。2.2．2冷冻保护液的配置

8、对照组保护液用甘油、三过蒸馏水及生理盐水进行调制，实验组的保护液用甘油、三过蒸馏水、生理盐水、菟丝子水提取液进行调制，两组的甘油含量相同，酸碱度相同（试纸法），渗透压无统计学差异（使用冰点渗透压测量仪）。2.2．3标本采集病人或捐精者，采用手淫法常规取精，经常规