植物组织中可溶性糖和淀粉含量的测定

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1、植物组织中可溶性糖和淀粉含量的测定 一、原理淀粉是由葡萄糖残基组成的多糖，在酸性条件下加热使其水解成葡萄糖，然后在浓硫酸的作用下，使单糖脱水生成糠醛类化合物，利用蒽酮试剂与糠醛化合物的显色反应，即可进行比色测定。二、实验材料、试剂与仪器设备（一）实验材料：红薯块根。（二）试剂1、浓硫酸（比重1.84）。2、9.2mol/L高氯酸。3、80%酒精4、葡萄糖标准液（称取已在80℃烘箱中烘至恒重的葡萄糖100mg，配制成100ml溶液，既得1mg/ml的标准液）；5、蒽酮试剂：[100mg蒽酮溶于100ml稀硫酸（76ml浓硫酸加水至100ml）]。（三）仪器设备电子天平，容量瓶（100

2、mL、50mL），漏斗，小试管若干支，恒温水浴锅，刻度吸管（0.5mL、2.0mL、5mL），分光光度计，记号笔。三、实验步骤1.标准曲线制作。取标准糖溶液将其稀释成一系列0-100μg/μl的不同浓度的溶液中，按上述方法分别测定OD625nm值，然后绘制标准曲线。管号012345葡萄糖标准液（μL）020406080100糖含量（μg）020406080100加入的水(μL)100806040200蒽酮试剂（mL）111111OD62502.样品提取（1）可溶性糖含量测定称取50～100mg粉碎过100目筛的烘干样品，置于15mL刻度试管中，加入6～7mL80％乙醇，在80℃水浴

3、中提取30min，取出离心（3000rpm）5min，收集上清液。重复提取两次（各10min）同样离心，收集三次上清液合并于烧杯，置于85℃恒温水浴，使乙醇蒸发至2～3mL，转移至50mL容量瓶，以蒸馏水定容。吸取上述上清液1ml，加入5ml蒽酮试剂混合，沸水浴10min,取出冷却。在625nm处测定OD值，从标准曲线上得到提取液中糖的含量（ug）。（2）淀粉含量的测定向沉淀中加蒸馏水3mL，搅拌均匀，放入沸水浴中糊化15min。冷却后，加入2mL冷的9.2mol/L高氯酸，不时搅拌，提取15min后加蒸馏水至10mL，混匀，离心10min，上清液倾入50mL容量瓶。再向沉淀中加入

4、2mL4.6mol/L高氯酸，搅拌提取15min后加水至10mL，混匀后离心10min，收集上清于容量瓶。然后用水洗沉淀1～2次，离心，合并离心液于50mL容量瓶用蒸馏水定容供测淀粉用。取待测样品提取液1.0mL于试管中，再加蒽酮试剂5mL，快速摇匀，然后在沸水浴中煮10min，取出冷却，在625nm波长下，用空白调零测定光密度，从标准曲线查出糖含量（μg）。