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时间:2018-07-06
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1、抑癌基因P53和癌基因MDM2在肾透明细胞癌中的表达及意义论文【摘要】目的探讨抑癌基因P53蛋白、癌基因MDM2蛋白在肾透明细胞癌中的表达及发生、发展中的意义。方法采用免疫组织化学法检测60例肾透明细胞癌、20例正常肾组织中抑癌基因P53、癌基因MDM2蛋白的表达情况。结果60例肾透明细胞癌组织中P53阳性表达率为41.66%(25/60),显著高于正常肾组织的10%(2/20),差异有统计学意义(P<0.05);60例肾透明细胞癌组织中MDM2阳性表达率为53.33%(32/60),显著高于正常肾组织的0%(0/20),差异有统计学意
2、义(P<0.05);P53和MDM2二者有一致性(χ2=2.9,P=0.09)。结论P53与MDM2共同参与肾透明细胞癌的发生、发展,P53与MDM2可作为评价肾透明细胞癌的生物学指标。【关键词】P53;MDM2;肾肿瘤;免疫组织化学【Abstract】ObjectiveToinvestigatetheexpressionofantioncogeneP53andcancergeneMDM2proteinsandtheirsignificanceinthepathogenesisandprogressofrenalclearcellca
3、rcinoma.MethodsTodetecttheexpressionofP53andMDM2in60casesofrenalclearcellcarcinomaand10casesofnormalkidneytissuesmunohistochemicalmethod.ResultsThepositiverateofP53inthetissuesofthe60casesofrenalclearcellcarcinomais41.66%(25/60),muchhigherthan10%(2/20)alkidneytissues.The
4、reisstatisticalsignificanceinthedisparity(P<0.05).Furthermore,thepositiverateofMDM2inthetissuesofthe60casesofrenalclearcellcarcinomais53.33%(32/60),higherthan0%(0/20)alkidneytissues.Similarly,thereisstatisticalsignificanceofthedisparity(P<0.05).Therefore,P53andMDM2arepos
5、itivelycorrelatedtoagreatextent(χ2=2.9,P=0.09).ConclusionBothP53andMDM2participateinthepathogenesisandprogressofrenalclearcellcarcinomaandtheycanbeconsideredasthebiologicalindextoevaluaterenalclearcellcarcinoma.【Keys,immunohistochemistry肾透明细胞癌是人类泌尿系统常见的恶性肿瘤之一,.freel以上的正常
6、肾组织,术后标本经10%福尔马林固定、石蜡包埋。P53、MDM2鼠抗人单克隆抗体,免疫组化EliVision试剂盒、DAB显色试剂盒均购自福州迈新生物技术开发有限公司。1.2方法常规石蜡包埋切片,制成5μm厚连续切片,黏附于APES处理过的载玻片上,75℃烤片1h,脱蜡,水化,蒸馏水浸泡冲洗,免疫组织化学染色:①高温高压抗原修复;②用PBS液冲洗(5min×3次),3%H2O2室温下孵育10min(以清除过氧化物酶的活性),用PBS液冲洗(2min×3次);③5%~10%正常山羊血清封闭,室温下孵育10min;④除去血清,分别滴加P53
7、、MDM2一抗工作液,4℃冰箱过夜,PBS液冲洗(5min×3次);⑤滴加生物素标记的二抗,37℃孵育30min,PBS液冲洗(5min×3次);⑥滴加SABC复合物,37℃30min,PBS冲洗,(5min×3次);⑦滴加DAB底物,孵育10min左右显色;⑧流水冲洗,苏木素复染,盐酸酒精分化,氨水返蓝。逐级酒精脱水,二甲苯透明,中性树胶封片。用已知阳性标本作阳性对照;以PBS液代替一抗作阴性对照。1.3结果判定肿瘤细胞核染成棕黄色或棕褐色,胞浆染成浅黄色或棕黄色为阳性反应,染色结果参照文献[3]评分方法,以每张切片在400倍镜下均观
8、察整体染色情况,选择5个有代表性的区域,每个区域计算200个细胞。阳性细胞数计分:阳性数<5%为0;阳性数>5%,但≤35%为1;阳性数>35%,但≤70%为2;阳性数>70%为3。着色强度计分:不着色为0
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