针对her2-neu的sirna对非小细胞肺癌细胞生长的抑制作用论文

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1、针对HER2/neu的siRNA对非小细胞肺癌细胞生长的抑制作用论文任新玲，钱桂生，鲍炜，付海京，贾林涛，张瑞，王涛，许彦鸣.freelorgroallcelllungcancerbysmallinterferingRNAtargetingtoHER2/neugene【Abstract】AIM:ToconstructRNAinterference(RNAi)vectortodoorgroallcelllungcancer.METHODS:Oligonucleotidesof64basepairsforhairpinRNAtargetingHER2/neuicallysynthesizeda

2、ndannealed,andclonedintopSUPERvector．Afteridentifiedbyrestrictiondigestion，therightvectorsanlungadenocarcinomacellline.TheHER2mRNAmunofluorescencestaining.FCManalysisandMTTmethodeasurecellcycleandcellgroberofcellsinG0/G1phaseby9.9%,andinhibitthetumorcellgroberofcellsinG0/G1phase,andthensloorcells．

3、ThismaybeausefultherapeuticstrategyforNSCLCoverexpressingHER2/neu.【Keya,nonsmallcelllung;HER2/neu【摘要】目的：构建针对HER2/neu的RNA干涉载体，观察对HER2/neu表达抑制及抑制后对非小细胞肺癌生长的影响.方法：设计和合成长度为64nt的脱氧寡核苷酸链，退火互补成双链，克隆至pSUPER质粒载体，转化DH5α菌株，提取质粒，转染过表达HER2/neu的肺腺癌细胞系SPCA1，RTPCR检测HER2/neu的mRNA表达，分析细胞周期变化，MTT法观察细胞生长.结果：肺腺癌细胞系SPC

4、A1存在HER2/neu过表达；成功构建了HER2/neu特异性RNA干涉载体pSUPERsiHER2；瞬时转染SPCA1细胞，HER2/neu的mRNA及蛋白表达均降低；G1期细胞较亲代增加9.9%；肿瘤细胞增殖速度减慢(P＜0.05).结论：成功构建了HER2/neuRNA干涉载体，转染后可有效降低肺腺癌细胞系SPCA1HER2/neu的mRNA转录及蛋白水平表达，阻滞转染细胞于G1期，造成转染细胞生长速度减慢，这有望为肺癌基因治疗提供一种选择手段.【关键词】siRNA；RNA干涉；癌,非小细胞肺；HER2/neu0引言HER2/neu是由癌基因ErbB2/neu编码的具有酪氨酸蛋白激

5、酶活性的跨膜糖蛋白，分子量为185ku,属表皮生长因子受体(epidermalgroallcelllungcancer,NSCLC)等恶性肿瘤存在HER2/neu过表达，与肿瘤的发生、转移、血管形成及化疗耐药等有关［1-4］，本研究采用合成的编码针对HER2/neusiRNA的脱氧寡核苷酸模板序列，插入线性化pSUPER载体，把重组质粒转染过表达HER2/neu的肺腺癌细胞系SPCA1，观察转染后对HER2/neumRNA转录和蛋白表达的抑制，及其对肺癌细胞周期及生长的影响.1材料和方法1．1材料pSUPER质粒和大肠杆菌DH5α菌种由第四军医大学生物化学与分子生物学教研室保存；肺腺癌细胞

6、系SPCA1由第四军医大学免疫学教研室保存；DNAMarkerDL2000，LipofectamineTM2000为Takara公司产品；细胞培养试剂、逆转录试剂盒、TRIZOLReagent、T4DNA连接酶、TaqDNA聚合酶、ConcertTMPlasmidMidiprepSystem购自GibcoBRL公司；HER2/neu特异性单抗(小鼠抗人)购自neomarkers公司；FITC二抗(羊抗鼠)、辣根过氧化物酶（HRP）二抗(羊抗鼠，IgG)购自TransductionLaboratories公司.1．2方法1．2．1间接免疫荧光染色取制备好的过夜SPCA1细胞爬片，PBS洗涤，

7、40g/L多聚甲醛固定,3g/LTriton100室温10min，依此加入HER2一抗(含10g/LBSA的PBS按1∶200稀释)4℃过夜，FITC二抗(1∶200稀释)室温1h，DAPI室温3min，荧光显微镜观察并照相.1．2．2序列设计在NCBI数据库中查找人HER2/neu的mRNA全序列，提交发夹状RNA设计网站选择最佳干涉位点，本研究选取的靶位点是：547～566.针对靶位点设计脱氧寡核苷酸序列如下：oli