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1、磷酸化AKT在非小细胞肺癌中的表达意义及与预后的关系临床肺科杂志2011年1O月第l6卷第10期l633磷酸化AKT在非小细胞肺癌中的表达意义及与预后的关系李克芬宋丽【摘要】目的探讨磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达,与临床病理特征的关系及与NSCLC患者预后的关系.方法免疫组化检测95例NSCLC组织中的磷酸化AKT的表达,并分析这种蛋白表达与预后之间的关系.结果磷酸化AKT的阳性表达率为67.37%(64/95),与各临床病理特征的相关性无统计学意义(P>0.05).单因素分析磷酸化AKT与预后无关(P=O.729),多因素分析与生存时间无关(P=0.
2、731).结论磷酸化AKT的阳性表达率对NSCLC患者预后无提示意义,不能成为预后指标.非小细胞癌(NSCLS)占肺癌的75%一80%,NSCLC的早诊断,早治疗成为提高治愈率的关键.AKT,又名蛋白激酶B,是一种丝氨酸/苏氨酸激酶,具有酪氨酸308及丝氨酸473两个磷酸化位点,只有两者均活化才具有活性,目前已得到公认在肺癌的发生,发展中起到关键性作用.AKT的磷酸化状态(p-AKT)为其活化状态,发挥其生物功能….关于国人NSCLC患者p-AKT与患者预后关系尚无报导.本实验旨在研究p-AKT与NSCLC患者的临床病理特征间的关系及与预后的关系.材料与方法一,连续选取我院2005年8月至20
3、08年8月接受根治性手术治疗的NSCLC患者的存档手术标本95例,为存档蜡块.其中女性30例,男性65例;大于等于65岁49例;按组织学分类:腺癌52例,腺鳞癌5例,鳞癌27例,支气管肺泡癌5例,其他6例,根据1997年国际抗癌联盟(UICC)TNM分期标准:I期50例,Ⅱ期16例,Ⅲ期27例,V期2例,根据有无淋巴结转移分为淋巴结阳性组40例,阴性组55例.完整随访79例研究对象.全部病例术前未接受化疗或放疗治疗.二,主要试剂兔抗人p-AKT(Ser473)多克隆抗体为ABcam公司产品.三,试验步骤所有标本均连续3m切片,58℃烘片3h,二甲苯脱蜡,梯度酒精至水化,使用煮沸法(95～98℃
4、,20min)抗原修复,冷却至室温,常规PBS冲洗5minX3,3%过氧化氢孵育15min,PBS冲洗5min×3,滴加一抗,工作浓度均为1:100,4~C孵育16h,PBS冲洗5min×3,DAB显色,常规脱水封片.设置阴性和阳性对照,阴性对照采用PBS代替一抗,已知阳性片为阳性对照.四,评定标准用光学显微镜观察免疫组化染色的切片,进行半定量评估,p-AKT定位于胞质和(或)胞核.每个切片随机观察5个高倍视野,计数100个细胞.p-AKT的评分标准:无染色或<30%肿瘤细胞染色为阴性,>30%肿瘤细胞染色为阳性,黄色为(+),棕黄色为(++),黄褐色为(卅).(一)即阴性表达,(
5、+)和(++),(卅)即为阳性表达.作者单位:1.266109山东青岛,青岛市城阳区人民医院呼吸科2.266109上海,上海市第六人民医院五,统计处理应用SPSS16.0软件做统计学分析,免疫组化染色积分结果与临床病理特征的关系采用x检验,单因素生存分析组间比较多因素分析采用CoxRegression比例风险模型分析.以P<0.05为有统计学意义.结果一,p-AKT蛋白表达与NSCLC患者临床病理特征关系:p-AKT只在肿瘤细胞表达,间质细胞无表达.p-AKT蛋白在NSCLC组织中的阳性表达为67.37%(64/95).根据卡方检验得出:p-AKT的阳性表达与NSCLC问的临床病理特征(
6、性别,年龄,吸烟史,病理,临床分期,分化程度,淋巴结转移,肿瘤大小)均无统计学意义(P>0.05).P—AKT在女性,非吸烟,腺癌患者的阳性表达率较其他高,但尚未构成统计学意义(P>0.05).图1为p-AKT的阳性表达实例.而在正常肺组织中p-AKT蛋白呈阴性(O%)表达(见图2),二者相比差异有统计学意义(P<0.05).阴性对照采用磷酸盐缓冲液PBS代替一抗图片(见图3).图1p-AKT在肿瘤细胞胞质/胞核的表达(40O×)二,p-AKT与NSCLC预后的关系:Kaplan—Meire法对79例有随访信息的患者进行生存分析.p-AKT表达与患者预后未构成统计学关系(P=
7、0.729);进一步对p-AKT表达阳性的患者进行生存分析,认为肺癌患者的生存时间与p-AKT的表达与否无关(P:0.854).CoxRegression比例风险模型多因素分析,提示p-AKT(P=O.731)与生存时间无关.1634临床肺科杂志2011年1O月第16卷第l0期图2p-AKT在正常肺组织中阴性表达(100×)图3肺癌组织中P?AKT表达的阴性对照(100×)讨论关于p-AKT的免疫
