金纳多对rcs鼠视网膜色素变性神经元保护作用论文

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1、金纳多对RCS鼠视网膜色素变性神经元保护作用论文【摘要】目的探讨金纳多（Ginaton，EGb761）对RCS大鼠视网膜色素变性神经元保护作用的机制。方法将出生后雄性RCS大鼠48只随机分为给药组和对照组。给药组大鼠从生后7d开始腹腔注射金纳多，每3d注射一次，剂量为100mg/kg。对照组大鼠注射生理盐水，剂量相同。苏木精伊红染色和TUNEL检测观察EGb761对视网膜色素变性神经元的保护作用。应用免疫组织化学方法检测Caspase2蛋白的表达。结果给药组大鼠生后20和25d，感光细胞的数目与对照组大鼠比较明显增加

2、（t＝3.32、3.56,P0.05）。给药组大鼠生后25dTUNEL检测阳性细胞数目比对照组少，差异有统计学意义(t＝3.74,P0.05)。生后25～40d，给药组和对照组大鼠在节细胞层和内核层观察到Caspase2阳性染色。给药组大鼠生后20和25d时内核层Caspase2阳性细胞数少于对照组（t＝2.87,P0.05）。结论在RCS大鼠视网膜变性的早期.freelechanismsofGinaton(EGb761)onhereditaryretinaldystrophyinRCSrats.MethodsAto

3、talof48maleRCSratslydividedintotreatedandcontrolgroups.EGb761100mg/kgsevendaysafterbirth；salineedicationbeingthesameasthetreatedgroup.TheprotectiveeffectofEGb761againstretinaldystrophymunohistochemistry.ResultsThenumberofphotoreceptorinthetreatedgrouporethanthati

4、nthecontrolsat20and25daysafterbirth（t＝3.32,3.56;P0.05）.TberofTUNELpositivecellsofthetreatedgroup25to40daysafterbirth,theCaspase2positivecellsberofpositivecellsintheinnernuclearlayeroftreatedgroupechanismsmayberelatedtotheloentosa;EGb761;apoptosis;Caspase2prot

5、ein;rats视网膜色素变性是一种眼科十分常见的致盲性疾病，到目前为止，其发病机制尚不清楚，亦无有效的防治办法。1938年，BOURNE等［1］首次报道了自发性蜕变的鼠种——RCS(RoyalCollegeofSurgeons)大鼠，人们基于这一动物模型进行了大量研究。RCS大鼠主要表现为视网膜色素上皮（RPE）不能有效吞噬感光细胞外节脱落的膜盘，致使膜盘堆积，感光细胞变性［2］。随着凋亡概念的提出，1994年TSO等［2］认为RCS大鼠感光细胞变性是通过凋亡的途径实现的。金纳多（Ginaton，EGb761）是从银杏

6、叶中提取的复合物，可以增加脑血管的血流量，保护脑细胞，清除有害的氧化自由基，并有显著的抗凋亡作用［3］。本实验从感光细胞开始凋亡时观察EGb761对神经元的保护作用，并探讨EGb761的作用机制，为临床上日益增多的视网膜色素变性疾病的治疗提供实验和理论依据。1材料与方法1.1组织来源出生后雄性RCS大鼠48只，随机分为给药组和对照组。12h光照12h黑暗循环条件下饲养，自由饮食、饮水。给药组大鼠从生后7d开始腹腔注射EGb761，每3d注射一次，剂量为100mg/kg。对照组大鼠从生后7d开始腹腔注射同剂量生理盐水。两

7、组大鼠分别在生后15、20、25、30、35、40d处死，取其视网膜组织，观察EGb761对感光细胞的保护作用。1.2标本制作水合氯醛（400mg/kg）腹腔麻醉动物后，取出眼球，冲洗后立即放入40g/L多聚甲醛中固定6h，去眼前节及玻璃体，依次放入100g/L蔗糖中2h，200g/L蔗糖中2h，300g/L蔗糖中过夜。用OCT包埋剂填满眼球,沿眼球矢状面作连续冷冻切片，厚度5μｍ，依次行苏木精伊红、TUNEL、Caspase2染色。1.3检测方法原位细胞凋亡检测和Caspase2免疫组化检测均按常规操作。原位细胞

8、凋亡检测阴性对照切片不加末端核糖核酸转移酶，阳性对照切片在反应前先用DNA酶Ⅰ消化。Caspase2免疫组化检测阴性对照切片不加一抗。1.4结果判定采用激光共聚焦显微镜（OLYMPUS,.freel长视野内阳性细胞数。2结果2.1苏木精伊红染色2.1.1对照组大鼠生后15d视网膜还未发育成熟。20d时，视杆层厚度