原子力显微镜观察jagged1对dc分化的影响

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1、原子力显微镜观察Jagged1对DC分化的影响王炯坤,胡明铅,邢飞跃【摘要】目的:探讨Jagged1对树突状细胞(DC)分化的形态学影响。方法:应用骨髓法诱导培养DC,并利用原子力显微镜(AFM)观察细胞的超微结构。结果:与对照组相似,Jagged1组的细胞形态不规则,伪足分化和突出的片状结构较为明显,且表面粗糙;相反,DAPT组细胞的伪足不明显,多数细胞趋于圆形,表面相对光滑。此外,Jagged1组的细胞高于对照组和DAPT组,而直径则与对照组相当。结论:Jagged1对DC分化形态的影响不大,而DAPT组的细胞形态发生明显改变。【关键词】Jagged1;树突状细胞;原子

2、力显微镜;超微结构〔Abstract〕AIM:ToexploretheeffectofJagged1onthemorphologyofdendriticcell(DC)differentiation.METHODS:MousebonemarroIL4andrmGMCSF.Atomicforcemicroscopy(AFM)ilartothecontrol,thecellsinJagged1groupdisplayedirregularshapeostofthemoothsurface.Furthermore,theheightofthecellsinJagged1gro

3、upeterofthecellsinbothorphologyofDC,butsignificantchangesinthemorphologyofDCinDAPTgrouphaveoccurred.〔Keyicforcemicroscopy;ultrastructure〔摘要〕目的:探讨Jagged1对树突状细胞(DC)分化的形态学影响。方法:应用骨髓法诱导培养DC,并利用原子力显微镜(AFM)观察细胞的超微结构。结果:与对照组相似,Jagged1组的细胞形态不规则,伪足分化和突出的片状结构较为明显,且表面粗糙;相反,DAPT组细胞的伪足不明显,多数细胞趋于圆形,表面相对

4、光滑。此外,Jagged1组的细胞高于对照组和DAPT组,而直径则与对照组相当。结论:Jagged1对DC分化形态的影响不大,而DAPT组的细胞形态发生明显改变。〔关键词〕Jagged1;树突状细胞;原子力显微镜;超微结构Notch是在果蝇中发现的调控胚胎发育的I型跨膜蛋白,在细胞的增殖、分化和凋亡的进程中起着重要的作用〔1〕。Jagged1作为Notch蛋白的主要配体之一,丰富地表达于骨髓基质细胞,影响树突状细胞(dendriticcell,DC)细胞的发育和分化。Gabrilovich小组的研究表明Notch信号通路是DC分化所必需的,Jagged1阻止DC分化成熟,而

5、Deltal促进DC分化成熟,敲除Notch1的胚胎干细胞和造血前体细胞不能分化成DC或不表达成熟的表面标志物〔2〕。相反,MacDonald小组运用条件敲除骨髓Notch1基因的小鼠则表明Notch1不影响DC的发育〔3〕。另外,也有研究表明,Jagged1能诱导人的单核细胞分化成成熟的DC。因此,Notch信号通路对DC分化的影响还存在争议。原子力显微镜(atomicforcemicroscopy,AFM)具有可直接在大气或液相中直接观察样品,对样品无损伤,且达到纳米精度的分辨率,可测量细胞的高度、长度和粗糙度等优点,能更真实和细微地反映细胞的形貌特征的变化。因此,本实

6、验中利用AFM结合IL4和GMCSF体外诱导DC的经典模型观察Jagged1对DC分化的影响,不仅为Notch信号通路在DC分化中的作用提供了形态学方面的证据,也为AFM在细胞分化方面的运用进行了探索。1材料和方法1.1材料雄性SPF级BALB/c小鼠(6周龄,体质量18～22g),购自中山医科大学实验动物中心。RPMI1640培养液、胎牛血清(FBS)为GibcoBRL公司产品。L谷氨酰胺、β巯基乙醇和DAPT(N〔N(3,5difluorophenyl)Lalanyl〕Sphenylglycinetbutylester)均购自Sigma公司。r

7、mIL4、rmGMCSF购自Peprotech公司。Jagged1/Fc为RDSystems公司。AntimouseCD11cFITC为eBioscience公司。戊二醛为日本京都公司。FACSCalibur流式细胞仪购自BectonDickinson公司。AFM购自Thermomicroscopes公司。1.2方法1.2.1骨髓细胞的制备参照Lutz等〔4〕法进行,并略加改良。取BALB/c小鼠断颈处死,无菌分离完整的股骨及胫骨,剪断骨头两端,用PBS冲洗骨髓腔,充分吹打骨髓细胞团,收集骨髓细胞悬液离心