五指毛桃药材高效液相指纹图谱的实验研究

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1、五指毛桃药材高效液相指纹图谱的实验研究席萍黄耀海黄月纯蔡庆群曹艳芳【摘要】目的建立五指毛桃药材的高效液相(HPLC)指纹图谱。方法采用高效液相色谱法，选用XDB－C18色谱柱（4.6mm×250mm,5μm）。柱温25℃；检测波长246mm。流动相为甲醇-水。梯度洗脱：0min，甲醇-水（15∶85）；20min，甲醇-水（55∶45），40min；甲醇-水（85∶15）；45min，甲醇-水（100∶0）；50min，甲醇-水（15∶85）。流速1ml/min；运行时间50min；检测波长为246nm。结果五指毛桃药材共有9

2、个共有峰。结论实验方法可行，可为检测五指毛桃药材质量控制标准提供参考。【关键词】五指毛桃指纹图谱高效液相色谱法五指毛桃（RadixFici）为桑科植物粗叶榕FicushirtaVahl.的干燥根。最早称为无爪龙，记载于清代的《生草药性备要》，目前临床使用习称五爪龙，许多现代大型中药工具书称之为五指毛桃，商品名亦称五指毛桃〔1〕。2004年版《广东省中药药材标准》将其以五指毛桃的名称列入标准中〔2〕。本品为华南地区常用中药材，味甘，性平，有健脾补肺、利湿舒筋功能，主治脾虚浮肿、食少无力、肺痨咳嗽、盗汗、带下、产后无乳、风湿痹痛、

3、水肿、肝硬化腹水、肝炎、跌打损伤，临床疗效显著。梅州地区宜将其作为食疗常用品，家喻户晓。研究表明五指毛桃药材的化学成分主要是补骨脂素以及佛手内酯、油酸、亚油酸、十六酸、十八酸等成分，这些成分在沸水中煎出均能产生香气,民间习惯以其香味的浓郁程度来判断其质量的优劣。　　据文献检索有关五指毛桃的栽培技术研究〔3〕，组织培养研究〔4〕、挥发油成分的分析〔5，6〕、以及测定其成分含量的薄层扫描法研究〔7〕等均有报道。但对五指毛桃药材指纹图谱的研究却未见报道，为更好地评价五指毛桃药材质量的均匀性和稳定性，提高其质量控制标准，我们收集了不同

4、产地五指毛桃药材，采用高效液相色谱法，建立了五指毛桃药材的指纹图谱分析方法。　　1器材　　1.1仪器高效液相色谱仪(HP-1100，安捷伦)；二极管阵列检测器（DAD）；色谱柱：XDB－C18（4.6mm×250mm,5μm，安捷伦）。　　1.2试药甲醇(色谱试剂,批号051105101,天津市四友生物医学技术有限公司)；水为超纯水；补骨脂素对照品（739-200209）(由中国药品生物制品检定所提供)；样品：五指毛桃药材共9批（见表1），均为当年新鲜采集晒干，委托广州致信中药饮片公司在各地收集并鉴定。见表1。　　表1五指毛桃

5、药材来源（略）　　2方法　　2.1色谱条件色谱柱为Hypersi1ODS(250mm×4.0mm；5μm)；流动相，甲醇-水；梯度洗脱条件：0min，甲醇-水（15∶85）；20min，甲醇-水（55∶45）；40min，甲醇-水（85∶15）；45min，甲醇-水（100∶0）；50min，甲醇-水（15∶85）；流速，1ml/min；柱温为室温；进样量，10μl；检测波长246nm。　　2.2对照品溶液的制备　精密称取补骨脂素对照品0.79mg，加甲醇制成0.395mg/ml的溶液，摇匀，即得。　　2.3供试品溶液的制备　

6、称取五指毛桃药材粉末约5ｇ，置锥形瓶中，加入甲醇50ml，浸泡过夜，超声处理30min，滤过。滤液蒸干，残渣加甲醇溶解，定容至1ml。　　2.4测定方法　分别精密吸取对照品溶液及供试品溶液各10μl，注入高效液相色谱仪，记录50min的色谱图。　　3结果　　3.1精密度实验　取同一份供试品溶液，连续进样5次，其色谱峰保留时间的RSD均在0.3%以内，峰面积的RSD均在5%以内。保留时间和峰面积基本无明显变化，符合指纹图谱技术要求。　　3.2稳定性实验取同一份供试品溶液，分别在0，2，4，6，12h处检测，其色谱峰保留时间的RS

7、D均在0.2%以内，峰面积的RSD均在5%以内。表明样品溶液在12h内稳定。　　3.3重复性实验取同一批样品如法制备供试品5份检测，其色谱峰保留时间的RSD均在0.3%以内，峰面积的RSD均在5%以内。保留时间和峰面积基本无明显变化，表明方法重现性较好。　　3.4主要色谱峰的建立　分别精密吸取对照品溶液及供试品溶液各10μl，注入高效液相色谱仪，记录50min的色谱图。检测指认结果9批五指毛桃药材的指纹图谱，与参照物补骨脂素的色谱峰（S）相对应的位置上，有一主要色谱峰，其占总峰面积的百分比约为50.26％～62.27％。50m

8、in内有9个色谱峰是9批五指毛桃共有的。其在5号峰和6号峰（保留时间约在23.5min和27min）的位置更具有特征性，为主要共有峰，5号峰对应为补骨脂素的色谱峰（S）。因此，最终确定9个色谱峰为共有指纹峰见图1，共有指纹峰的保留时间见表2，峰面积百分含量见表3。　　图1五指