灰黄霉素超声波提取工艺研究论文

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1、灰黄霉素超声波提取工艺研究论文【摘要】目的探讨超声波提取灰黄霉素的优化工艺条件。方法用紫外分光光度法(UV)测定灰黄霉素的含量。以灰黄霉素的提取率为评价指标，在单一影响因素考察的基础上，采用正交实验确定超声波提取灰黄霉素的优化工艺条件。结果超声波提取灰黄霉素的优化工艺条件为：10倍量的丙酮为提取溶剂，功率300ethodsThecontentofgriseofulvininextractorisdeterminedbyUVspectrophotometryandthecontentofgriseofulvinusedasqualitycontrolcrite

2、ria.Utilizingorthogonaltesttogainanoptimumextractionconditions,basedontheresultofsinglefactoralgorithm.ResultThebestextractionconditionsareasfolloeis40min,andtheultrasonicradiationtimeis3satatime.Thevalidateexperimentindicatesthattheconditiongainedbyexperimentisanoptimumone.Conclus

3、ionTheultrasonicextractionprocessofgriseofulvinisfeasible,andcouldbeusedinroutineoperation.KEYent灰黄霉素(griseofulvin)是1939年从灰黄青霉(Penicilliumgriseofulvin)培养液中得到的一种含氯代谢产物，1958年开始用于临床。1960年中国医学科学院抗生素研究所从我国土壤中得到灰黄霉素的生产菌，并研究试制成功灰黄霉素［1］。灰黄霉素是非多烯类抗真菌抗生素，已广泛用于治疗皮肤及角质层的真菌感染。对红色发癣菌、断发癣菌、硫毛发癣菌、

4、小孢子菌和絮状表皮菌等有抑制作用［1］。临床用于头癣、迭瓦癣、皮肤癣及手(足，甲)癣等体表真菌感染，特别对头癣的疗效显著，国内治愈率在90%以上［2］。灰黄霉素是存在于菌丝体内部的抗生素。目前工业上采用溶剂连续浸泡干菌体的提取方法，溶剂大多为丙酮［1，3，4］。考虑到常规提取所需时间较长，提取率较低，溶剂用量较大，本研究探讨采用超声波技术提取灰黄霉素的工艺，利用超声波的空化［5］作用、热效应、机械作用破坏菌体细胞壁，使溶剂易于渗透至细胞内，有效成分更多的转移到溶剂中，达到缩短提取时间，提高提取率的目的［6～8］。1仪器与材料1.1仪器U1810型紫外可见分

5、光光度计(北京普析通用仪器公司)，ALC210.4型电子天平(德国Sartorius公司)，JY922D超声波细胞粉碎机(宁波新芝生物科技股份有限公司)，HF2.5B超声波循环提取器(北京宏祥隆生物技术开发有限公司)。1.2材料灰黄霉素菌体(赤峰制药集团生产，编号：NI88)，对照品(中华制药厂产品，纯度为99.8%)，丙酮(天津市博迪化工有限公司)，95%乙醇(沈阳化学试剂厂)，氯仿(天津市博迪化工有限公司)，所用试剂均为分析纯。2实验方法2.1标准曲线的制备精密称取灰黄霉素对照品25mg，25ml丙酮溶液定容，配制标准溶液(初始浓度1.0mg/ml

6、)。精密量取标准溶液2ml于25ml容量瓶，用95%乙醇定容。取丙酮2ml置于25ml容量瓶中，95%乙醇定容，作为空白溶液。紫外光谱200～400nm全波长扫描，在326nm处有最大吸收峰。精密量取0.2、0.3、0.4、0.5、1.0和1.2ml的标准溶液分别置于25ml容量瓶中，用95%乙醇定容。取丙酮0.2、0.3、0.5、0.4、1.0和1.2ml分别置于25ml容量瓶中，用95%乙醇溶液定容，作为空白对照。在326nm处测其吸光度A值，测定结果计算得回归方程：A=14.782C+0.0017r=0.99982.2灰黄霉素含量测定称取灰黄霉素菌体(

7、含水5%)1.0g置于250ml烧瓶中，加入丙酮50ml，磁力搅拌回流提取三次，每次1h。测得菌体中灰黄霉素含量为30.67%。2.3灰黄霉素超声波提取影响因素考查(1)超声提取溶剂文献报道［3，9］灰黄霉素易溶于二甲基甲酰胺、二氯乙烷(以上溶解度约为10%～12%l溶解，超声条件设定为：功率400in，室温下进行提取，分别测定灰黄霉素溶液的吸光度，提取率分别为83.71%、78.69%和28.95%。由于丙酮对灰黄霉素的提取率较高，因此本实验选取丙酮作为超声提取溶剂。(2)溶剂用量称取灰黄霉素菌体5g，共6份，分别用4、8、10、12、16、20倍量丙酮溶

8、解，超声波条件不变。分别测定灰黄霉素溶液的吸光度，计