人红细胞冻干前负载海藻糖最佳化研究论文

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1、人红细胞冻干前负载海藻糖最佳化研究论文庄远刘景汉欧阳锡林陈麟凤车辑【摘要】为更好的实现海藻糖在红细胞冻干保存中的保护作用，关键是克服质膜对海藻糖的非渗透性，使胞质内海藻糖达到有效浓度。本研究的目的是通过对人红细胞负载海藻糖的规律性研究，筛选出海藻糖负载的最佳负载条件并评价海藻糖负载对红细胞各项理化指标的影响。在不同孵育温度（4、22和37℃）、孵育时间（0、2、4、6、8、10小时）、不同负载缓冲液浓度（0、200、400、600、800、1000mmol/L）条件下检测新鲜红细胞对海藻糖的成功负载量及红细胞各项理化指标；在固定负载条件下，对新鲜红细胞和4℃保存72小时红细胞

2、海藻糖负载、游离血红蛋白（FHb）、血红蛋白(Hb)和红细胞平均体积（MCV）进行了比较。结果表明：红细胞对海藻糖的负载与孵育温度、时间及负载缓冲液海藻糖浓度密切相关。随着温度的升高、时间的延长和负载缓冲液海藻糖浓度的增加，红细胞对海藻糖的摄取量也随之增加。在海藻糖负载最佳条件下，新鲜红细胞和4℃保存72小时红细胞的胞内海藻糖浓度、FHb浓度分别为65.505±6.314mmol/L、66.2±5.002mmol/L和6.567±2.568g/L、16.168±3.922g/L。结论：红细胞负载海藻糖的最佳条件是采用新鲜红细胞，在37℃条件下、海藻糖浓度为800mmol/L的

3、负载缓冲液中孵育8小时.freelizationofTrehaloseLoadinginRedBloodCellsbeforeFreezedryingAbstractThekeypointsforbetterprotectionoftrehaloseinfreezedryingredbloodcells(RBCs)aretoresolvenonosmosisoftrehalosetoredbloodcellsandtomakecytoplasmictrehalosetoreacheffectiveconcentration.Thisstudyedtoinvestigat

4、etheregularityofloadingRBCsalloadingconditionandevaluatetheeffectoftrehaloseonphysico-chemicalparametesofRBCsduringtheperiodofloading.Thecytoplasmictrehaloseconcentrationinredbloodcells,freehemoglobinandATPlevelinedatdifferentincubationtemperatures(4,22and37℃),differenttrehaolseconcentratio

5、ns(0,200,400,600,800and1000mmol/L)anddifferentincubationtimes(2,4,6,8and10hours),thecytoplasmictrehalose,.freeloglobin(FHb),hemoglobin(Hb)andmeancorpuscularvolume(MCV)infreshRBCsandRBCsstroredfor72hoursat4℃perature,timeandextracellulartrehaloseconcentration,theloadingoftrehaloseinRBCsalsoin

6、creased.Undertheoptimalloadingcondition,cytoplasmictrehaloseconcentrationandfreehemoglobinleveloffreshRBCsandRBCsstoredfor72hoursat4℃mol/L,66.2±5.002mmol/Land6.567±2.568g/L,16.168±3.922g/Lrespectively.ItisconcludedthatthemostoptimalconditionofloadingtrehaloseisthatfreshRBCsincubatein800mmol

7、/Ltrehalosesolutionfor8hoursat37℃.Thisconditioncanresultinaefficientcytoplasmictrehaloseconcentration.ThestudyprovidesanimportantbasisforlongtermpreservationofRBCs.KeyOsm,pH7.2）由154mmol/LNaCl,1.06mmol/LKH2PO4和5.6mmol/LNa2HPO4组成。负载缓冲液（TPBS）为不同摩尔浓度海藻糖溶于10