苯甲醇对红细胞冻干前海藻糖负载红细胞影响研究 (7)

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1、STR－PCR分析嵌合体在同种异基因造血干细胞移植中的应用作者：孙敬芬　韩晓苹　赵丹丹　汪菲菲　靳海杰　高春记　达万明　于力作者单位：中国人民解放军总医院血液科，北京100853【摘要】　　利用荧光标记的多重PCR扩增短串联重复序列(STRPCR)结合毛细管电泳检测供者细胞嵌合率(DC),以探讨该方法的连续检测对异基因造血干细胞移植(alloHSCT)后转归的预警作用，采集27例清髓性外周血干细胞移植患者移植前、移植后不同时段的外周血或骨髓，DNA样本用ProfilerPlus和CofilerPlus商品化试剂盒扩增后,用ABI310

2、遗传分析仪进行毛细管电泳,确定基因位点及峰面积,根据基因型的差异选择嵌合率计算公式。结果表明：两种试剂盒测得的DC嵌合率一致;在27对中能区别出供受差别的STR位点，ProfilerPlus为6.3(4-9)个,CofilerPlus为4.9(2-6)个。26例患者均在移植后28天出现供者细胞，1例患者未出现供者细胞。14例患者DC100%,均获得持久植入,至今仍无白血病生存；另有9例患者出现不稳定混合嵌合(MC)状态(DC为0%-90.2%),其中5例为血液学复发。27例病人中有6例死亡。上述5例复发患者均在出现临床症状前发生DC量下降

3、;供者细胞完全嵌合组移植物抗宿主病(GVHD)的发生率高于MC组。结论：动态检测DC可用于移植动力学研究,对移植物早期植入或被排斥、疾病复发以及GVHD的发生均有预警作用,对早期实施临床干预治疗有重要的指导意义。【关键词】同种异基因造血干细胞移植；STRPCR;毛细管电泳;嵌合体　　ApplicationofChimerismAnalysistoAllogeneicHematopoieticStemCellTransplantationbySTRPCRSUNJingFen,HANXiaoPing,ZHAODanDan,WANGF

4、eiFei,JINHaiJie,GAOChunJi,DAWanMing,YULiDepartmentofHematology,PLAGeneralHospital,Beijing100853,ChinaAbstractTheaimofthisstudywastoanalyzechimerism,evaluatethestatusofengraftmentandpredicttheoutcomeofallogeneichematopoieticstemcelltransplantation(alloHSCT)bymultiples

5、horttandemrepeat(STR)amplificationusingfluorescencelabelingpolymerasechainreaction(PCR)combinedwithcapillaryelectrophoresis.Peripheralbloodandbonemarrowin27patientswhoreceivedmyeloablativeallogeneticcelltransplantationwerecollectedbeforeandaftertransplantationindifferentt

6、imes.10and7differentSTRmarkerswerecoamplifiedinasinglereactionbyusingacommercialAmpF/STRProfilerPlus/CofilerplusPCRamplificationkits.SeparationofthePCRproductsandfluorescencedetectionwereperformedbyABIprism310GeneticAnalyzerwithcapillaryelectrophoresis.TheGenescanandGeno

7、typesoftwarewereusedforsizecallingandquantificationofpeakareas.Theformulatocalculatedonorchimerismvalueswasbasedonthedifferentallelicdistributiontypebetweendonorandrecipient.Theresultsshowedthatdonorchimerismwassimilarbythetwomethods.Themediannumberofinformativealleleswa

8、s6.3(4-9)byProfilerPlusand4.9(2-6)byCofilerPlus.Thedonorallelesappearedin26patientsonday28posttr