冷冻保存同种异体血管研究进展

《冷冻保存同种异体血管研究进展 》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、冷冻保存同种异体血管研究进展随着现代免疫学、冷冻生物学、分子生物学的发展，冷冻保护剂、免疫抑制剂的应用以及注重移植结构及功能的完整。冷冻保存同种异体静脉无论是基础研究还是临床实践都获得相当经验，但存在移植物再狭窄及替代小口径动脉(＜2mm)失败率高的缺点。近年来，有关动脉作为血管替代物逐渐被重视，取得一些进展，但尚需继续长期地探索和实践。1　血管移植免疫进展　　大量的实验和临床结果不但证实血管内皮细胞(EC)是移植排斥重要的靶器官，而且通过其抗原递呈作用、表型变化和细胞因子合成等，主动参与移植排斥过程。EC表达多种抗原，如：ABO血型抗原，MH

2、C抗原和血管内皮细胞抗原系统。在排斥过程中，EC上的抗原与其相应的抗体结合形成抗原抗体复合物，激活补体释放趋化因子，白细胞在补体参与下溶解EC，使基底膜暴露，激活凝血系统，形成血栓，激活的巨噬细胞释放白介素-1、肿瘤坏死因子等可提高EC表面组织因子活性，增加纤溶酶激活物抑制因子和减少血栓调理蛋白，EC在细胞因子刺激下可合成和分泌单核细胞趋化因子MCP-1/JE，吸引单核巨噬细胞迁移至移植物局部。同时表达ClassⅡ抗原，提供所有激活CD4+T细胞所必需的信号，并可产生各种细胞因子，引起表型的变化。另外内皮细胞膜还可作为血管紧张素转化酶场所，以使

3、血管紧张素Ⅰ转化成血管紧张素Ⅱ，使血管收缩。近来，一些学者发现血管平滑肌细胞也表达ClassⅠ和ClassⅡ抗原系统，参与排斥反应全过程〔1〕。2　同种异体血管移植的基础研究进展2.1　移植前血管处理及冷冻复温技术2.1.1　制备　(1)供体选择来源于新鲜尸体及创伤性截肢患者，采用美国组织库协会(AATB)制定的标准〔2〕。取血管应在死后4h完成，所有操作均在无菌条件下进行。(2)制备技术的基本原则：从供体获取血管应严格遵循无创伤技术；获取血管前15～30min，供体给予平滑肌松弛剂(罂粟碱)及抗凝药物(肝素)，以防止血管痉挛和血栓形成；保持制

4、备液和室温37℃；灌注压＜100mg。(3)理论上以37℃自身含罂粟碱肝素化血液低压灌注可最好保持血管的生物活性，但通常从供体获取血液是困难的。目前常采用37℃的生物培养液(如DMEM，1640)，Brocdbank等获得保存24h后80%内皮细胞存活率和平滑肌收缩度最大限度的保持〔3〕。2.1.2　冷冻复温　随着冷冻保护剂二甲基亚砜(DMSO)和甘油的应用及控温冷冻技术的成熟，血管活性得以很好的保持。DMSO因穿透力强，研究较多，其浓度以15%为最佳。控温冷冻第二步温值在-60～-80℃之间，冷冻速率为0.5～1℃/min，复温采用37℃水浴

5、快速复温。经过这样处理的静脉获得80%的内皮细胞存活率。Banbang等证实这些内皮细胞具有与正常内皮细胞相似的增值和抗凝血功能〔4〕。Salomon等也从冷冻保存静脉上获得表达HLA抗原的平滑肌细胞〔1〕。2.2　实验性同种异体移植与自体移植的比较性研究　同种异体血管移植的主要障碍是受体的免疫排斥反应。因此，研究在免疫缺陷的情况下在体冷冻保存血管移植的变化是必需的。这样自体冷冻血管不仅检验血管制备及宿主对移植物产生排斥反应的冷冻保存技术的效果，而且通过与同种异体移植物移植后组织结构与功能的对比，了解同种异体移植物在整个过程中的变化。　　自体移

6、植物在移植过程中，可因离体缺血、牵拉、切割、吻合及在受体动脉高压冲击下，内皮细胞可有不同程度的坏死，从而使位于内皮细胞下的结缔组织裸露于血流，使附壁血栓形成。1周后残留的附壁血栓向致密而平滑的纤维被膜演变，同时内皮细胞再生开始。内膜增生和动脉粥样硬化是发生在内皮下层两个相关联的病理现象，或许是不可避免的创伤适应性改变。移植血管中膜可见平滑肌细胞坏死和纤维替代，外膜因部分胶原纤维束断裂和血管滋养管栓塞，形成纤维瘢痕，移植后72h，新的滋养血管出现，2个月后基本恢复正常，神经再生于2～4周后开始。上述这些改变实质上是导致自体静脉移植后失败的病理基础

7、。　　相对于自体静脉移植的内膜增生，同种异体移植物动脉化主要是中膜增生〔5〕。当在同种异体移植物中又观察到的内膜增生是由于局部血栓沉积后成纤维细胞的重新排列，移植后10d内皮细胞因免疫反应而脱落，在随后的6个月内，裸露的内膜上纤维蛋白堆积减少并出现重新内皮化，3～6个月移植物外膜的血管周围组织可见游离淋巴细胞并在9个月后消失。移植后5个月前列环素(PGI2)生成量与受体动脉PGI2生成量相比有显著性差异(P＜0.001)〔6〕。新鲜静脉的顺应性明显低于正常动脉灌注压下动脉顺应性(P＜0.001)〔5〕，可以看出，尽管移植段静脉结构发生动脉化，但

8、其内膜功能和生物力学特性并未发生动脉化。自体移植物与异体移植物短期的不同在于异体移植物经历一个免疫反应及内皮细胞脱落的过程，因此，减少或阻止受体免疫排