临床微生物sop-血液及骨髓标本细菌学检验标准操作规程

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1、XXXX医院检验科微生物实验室血液及骨髓标本细菌学检验标准操作规程编号：MYCH/版本：第1版第0次修改页数：第5页共5页血液及骨髓标本细菌学检验标准操作规程1．目的规范血液及骨髓标本细菌学检验标准操作规程，确保检验结果准确可靠。2．适用范围血液及骨髓。3．标本3.1标本类型血液及骨髓。3.2标本采集3.2.1采血时间抗菌药物治疗前，发热初期或高峰时抽血。3.2.2采血频率对怀疑菌血症的成年病人，推荐同时在不同部位采集2~3套（每套包括一瓶需氧瓶、一瓶厌氧瓶或者两套需氧瓶），对感染性心内膜炎和真菌血症则应多次采集；婴幼儿病人，推荐同

2、时在不同部位采集2套，可不做厌氧培养。3.2.3采血量以培养基的1/10为宜，成人一次采血5~10ml，婴幼儿1~2ml。3.2.4骨髓标本用骨髓穿刺针从髂骨采集。3.3标本拒收标准3.3.1血培养瓶破裂或有明显污染。3.3.2培养瓶标识与化验申请单不符。3.3.3用过期的培养瓶采集标本、采血量不足等。3.3.4对于不合格标本，应及时通知采集人员重新留取标本。3.4标本保存采集标本后立即送到实验室，不能及时送检可置室温，切勿放冰箱。冬季血培养瓶在送检过程中应采取一定的保温措施。4．试剂、仪器4.1革兰染液、氧化酶试剂、3%过氧化氢、

3、血琼脂平板、巧克力平板、麦康凯平板、相关生化试剂等。4.2BACT/Alert3D或BACTEC9000全自动血培养系统、VITEK鉴定系统。成人需氧培养瓶、厌氧血培养瓶、儿童血培养瓶、革兰阴性菌鉴定卡(GNI+)、革兰阴性菌药敏卡(GNS)、革XXXX医院检验科微生物实验室血液及骨髓标本细菌学检验标准操作规程编号：MYCH/版本：第1版第0次修改页数：第5页共5页血液及骨髓标本细菌学检验标准操作规程兰阳性菌鉴定卡(GPI)、革兰阳性菌药敏卡(GPS)、真菌鉴定卡(YBC)、药敏纸片、ATB板条等。4.3接种针、接种环、电热灼烧器、

4、显微镜、孵育箱、C02培养箱等。4.4试剂的有效期和使用参照试剂说明书。5．细菌鉴定和药敏质控参见《质量管理程序》。6．检验步骤接收标本，立即对标本进行标号。门诊病人要同时登记住址，联系电话等病人信息。6.1自动化培养将血培养瓶置全自动血培养仪中。当标本有菌生长时，仪器发出阳性报警，应立即用无菌注射器抽取瓶内培养液作直接涂片革兰染色，镜检，将结果向临床医师报告，同时转种血琼脂平板、麦康凯平板或加做巧克力平板，并进行直接药敏试验，置35℃、5%CO2培养箱培养18～24小时。从琼脂平板上挑取菌落进行涂片染色及触酶和氧化酶试验。革兰阳性

5、菌和革兰阴性菌分别选用GPI及GNI上机进行细菌鉴定和药敏试验或者做K-B法药敏试验。6.2手工培养6.2.1将血培养瓶35℃孵育箱，经18～20小时孵育在血琼脂平板或巧克力平板上盲目转种一次。6.2.2盲目转种后，培养瓶继续孵育至第5日，每日观察一次有无菌生长，并摇匀继续培养，根据肉眼观察，对有细菌生长迹象，取菌悬液涂片作革兰染色，同时分离培养，接种需氧血琼脂平板、麦康凯平板或加做巧克力平板，并进行直接药敏试验，置35℃、5%CO2培养箱培养18～24小时。次日纯培养再进行鉴定及药敏试验。6.3特殊培养6.3.1布鲁菌属通常将血液

6、接种到双相血培养瓶内，培养环境应5%～10%CO235℃，每48小时观察有无细菌生长，若无细菌生长应继续培养，阴性应培养至30日后才可发出报告。XXXX医院检验科微生物实验室血液及骨髓标本细菌学检验标准操作规程编号：MYCH/版本：第1版第0次修改页数：第5页共5页血液及骨髓标本细菌学检验标准操作规程6.3.2乏养菌该细菌生长需要巯醇复合物和维生素B6。在血培养基中需加盐酸-磷酸吡多醛(0.001%)或L-半胱氨酸(0.05%～0.1%)或两者皆有，否则乏养菌不能生长。血培养物转种血琼脂平板上，然后交叉划线接种金黄色葡萄球菌，靠近金

7、黄色葡萄球菌有乏养菌生长。6.3.3L型细菌在培养基中含有10%蔗糖或甘露醇时，才适合L型细落生长。6.3.4心内膜炎特殊致病菌如果常规血培养72小时阴性而病人临床症状仍提示感染性心内膜炎，应提高培养基的营养或补加添加剂。有利于分离营养要求苛刻、生长缓慢的革兰阴性杆菌，如人心杆菌、侵蚀艾肯菌、金氏菌、伴放线杆菌、军团菌等细菌，应延长培养至2～4周，然后转种特殊的培养基。血液、骨髓7.操作流程置血培养瓶中需氧培养厌氧培养耐养试验血培养仪报警、挑取培养物涂片、染色转种平板35℃培养18～24h直接药敏细菌种类观察菌落特征及涂片、染色二级

8、报告一级报告仪器或手工细菌鉴定及药敏试验三级报告（最终报告）8.结果报告8.1阳性结果报告报告通常分为三级。8.1.1一级报告XXXX医院检验科微生物实验室血液及骨髓标本细菌学检验标准操作规程编号：MYCH/版本：第1版第0次修改页数